Interferencja RNA (RNAi, siRNA) Zjawisko wyciszania/ wyłączenia ekspresji genu przez dsRNA. Jego sekwencja jest zblizona so sekwencji wyłączanego genu. Wyłączenie możliwe na poziomach: a) Degradacji mRNA b) Blokowania translacji mRNA c)...
Izolacja DNA Cel: Wysokocząsteczkowy preparat (20-50kpz) Wysoki stopień czystości (DNA pozbawiony białek i inhibitorów enzymów) Wysoka wydajność Ogólne zasady izolacji zbliżone dla DNA pozyskiwanych z różnych komórek (bakterie, rośliny, zwierzęta) I etap: Mechaniczna maceracja tkanki lub liza k...
Izolacja i oczyszczanie białek 1) Izolacja chromatyny z wybranej tkanki 2) Ekstrakcja białek związanych z chromatyną (zależnie od właściwości białek, dla słabiej związanych 0,3M NaCl, silniej 0,6-2M NaCl) 3) Rozpuszczenie mieszaniny białek w ...
Izolacja RNA RNA: Mniejsze Mniej stabilne Bardziej zróżnicowane niż DNA Główne typy: rRNA, mRNA, tRNA (rRNA 80%, mRNA 1-2%) Większa różnorodność metod izolacji niż u DNA: Izolacja konkretnego typu RNA poprzez frakcjonowanie totalnego ...
Historia- wydarzenie kluczowe dla IG: 1950 Chargaff - zdefiniowanie relacji między 4 nukleotydani w DNA 1951 Mc Clintock - ruchome elementy genetyczne, kukurydza 1952 Hershey, Chase - geny zawierają DNA Ledeberg - odkrycie plazmidów (wektory) ...
Lokalizacja genów Badania in silico- za pomocą baz danych, oprogramowania, aparte na analizach DNA. Geny to nie losowa kombinacja NT, posiadają cechy wyróżniające je spośród sekwencji niegenowych. Podstawowe to: ORF- seria kodonów umożliwiając...
Markery molekularne Markery DNA- pula testów opartych bezpośrednio na cechach kwasów nukleinowych. Umożliwiają charakterystyke organizmu na poziomie jego genomu- proteomu (np. obecność/ brak jakiegoś genu lub białka, występowanie jakiejś szczególnej jego postaci, różnice w sekwencji wybranych elem...
PROMOTORY Promotor Odcinek DNA powyżej sekwencji genu, zawiera elementy rozpoznawane przez polRNA zależną od DNA (jej połączenie z promotorem rozpoczyna transkrypcję). Promotory eukariotyczne dodatkowo zawierają sekwencje rozpoznawane przez ...
SEKWENCJONOWANIE Sekwencjonowanie DNA: 1980: nagroda Nobla dla Sangera, Gilberta za opracowanie metod sekwencjonowania DNA 1988: powstanie projektu sekwencjonowania genomu ludzkiego (HGP) 1995: pierwszy, całkowicie poznany genom- Haeomophilus influenzae 1997: pierwszy genom eukariotyczny S.cere...
Techniki sekwencjonowania DNA Metoda chemiczna- Gilberta & Maxama- określanie kolejności nukleotydów dowolnego odcinka DNA (Nobel 1980) Metoda Sangera: Enzymatyczna- terminacji łańcucha, dideoksy. Szybka, prostsza. Istota: ddNTP włączane do nowo syntetyzowanego łań DNA przez pol DNA blokowały...
