Zakład Genetyki Uniwersytetu Warszawskiego GENETYKA MOLEKULARNA Materiały do zajęć laboratoryjnych Skrypt przygotowany przez pracowników Zakładu Genetyki UW Warszawa 2003 Spis treści Wstęp3 Enzymy restrykcyjne 4 Podstawowe enzymy modyfikujące DNA przydatne do klonowania6 Elektroforeza DN...
Rozdział 1. Dlaczego klonowanie genów i analiza DNA są istotne. Podstawowe założenie zasad ustanowionych przez Grzegorza Mendla jest takie, że każda dziedziczna właściwość organizmu jest kontrolowana przez czynnik zwany genem, który jest fizyczną cząsteczką, obecną gdzieś w komórce. Ponowne odk...
fragment DNA M13 amp R 3997 bp lacZ’ pEMBL8: wektor hybrydowy (fagemid) → Posiada zalety M13, ale jednocześnie pozwala na wklonowanie dłuższych fragmentów. • wektor jest hybrydą faga i plazmidu (w tym przypadku faga M13 i typowego plazmidu, np z serii PUC) • posiada oporność na ampicylinę ...
Wykład 5 16.03 Peroksydaza nie jest substratem, to białko. Zatem jak połączyć to białko z DNA? – Poprzez reakcję sieciowania aldehydem glutarowym. W ten sposób powstaje sonda, zaznakowana peroksydazą, która specyficznie wiąże się z DNA klonu. Jak przeprowadzić detekcję? Jak wykryć te miejsca,...
Wykład 6 23.03 Analiza produktów PCR Co należy zrobić, aby produkty były specyficzne? • Wpływ ma długość starterów → temperatura hybrydyzacji → temperatura syntezy. Przy odpowiednim doborze wszystkich tych aspektów otrzymujemy specyficzny produkt. Co po PCR? •
Genetyka 13.04 Potem (…) pierwszej nici.. a także drugiej cDNA. Widzimy zatem transkrypt ,który posiada na 3' końcu ciąg reszt A. Poli A ogon, do którego jest komplementarny oligonukleotyd. I ten oligo. służy jako matrycy, jako starter do syntezy pierwszej nici cDNA. Następnie, nie wnikamy w szc...
Inżynieria genetyczna Wykład 8, 13.04.2012, część II. Wracamy do wykładu zatem, proszę państwa pierwszą z metod, która pozwala na określenie miejsca interakcji białka z DNA, a także jak staram się Was przekonać także na wyciągnięcie bardzo wielu szczegółowych informacji zapewnia nam metoda EMSA...
Ostatni wykład zakończyłem przedstawieniem możliwości korzystania z sekwencji reporterowych i dla przypomnienia: jest to metoda do badania aktywności promotora. Istotą testu jest to, że badanie promotora jest prowadzone w takim układzie, w którym gen właściwy temu promotorowi zastępujemy genem r...
Techniki są jasne do państwa? Jeżeli ktoś czegoś nie rozumie to zapraszam do zadawania pytań, jeżeli nie to przejdziemy do innych problemów i innych metod analizy produktów ekspresji genów, bo o tym mówimy. Taką grupę metod stanowią meto...
Mutageneza z otrzymanie całego szeregu mutantów: 1. Mamy gen którego fragment odpowiada sekwencji kodującej reszty istotne dla aktywności enzymu oraz miejsca restrykcyjne R1 i R2 otaczające te sekwencję czyli kasetę. 2. Zamiast wprowadzać różne mutację i badać ich efekt a także efekt kilku mutac...
