To tylko jedna z 55 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Zakład Genetyki Uniwersytetu Warszawskiego
GENETYKA
MOLEKULARNA
Materiały do zajęć laboratoryjnych
Skrypt przygotowany przez pracowników
Zakładu Genetyki UW
Warszawa 2003
Spis treści
Wstęp..............................................................................................................................3
Enzymy restrykcyjne ......................................................................................................4
Podstawowe enzymy modyfikujące DNA przydatne do klonowania..............................6
Elektroforeza DNA w Ŝelach..........................................................................................8
Izolacja fragmentów DNA z Ŝelu agarozowego...........................................................11
Ligacja DNA ................................................................................................................12
Transformacja E. coli ..................................................................................................13
Izolacja DNA plazmidowego .......................................................................................16
Wytrącanie kwasów nukleinowych. .............................................................................18
Znakowanie kwasów nukleinowych .............................................................................19
Hybrydyzacja kwasów nukleinowych na filtrach.........................................................23
Izolacja RNA ................................................................................................................30
Elektroforeza RNA w Ŝelach ........................................................................................32
PCR..............................................................................................................................36
Elektroforeza białek w Ŝelach poliakryloamidowych ..................................................41
Technika Western.........................................................................................................46
Dodatek........................................................................................................................49
2
Wstęp
Celem ćwiczeń prowadzonych w ramach fakultetu Genetyka molekularna jest
przedstawienie wybranych metod biologii molekularnej oraz inŜynierii genetycznej. KaŜdy
student powinien opanować praktycznie prezentowane techniki, do których naleŜą:
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
komputerowa analiza sekwencji kwasów nukleinowych i białek
izolacja plazmidowego DNA
analiza restrykcyjna DNA (mapy restrykcyjne)
klonowanie genów (ligacja DNA z wektorem, transformacja E. coli, analiza klonów)
metoda PCR
heterologiczna ekspresja białek w E. coli
analiza białek metodą Western
znakowanie DNA izotopami radioaktywnymi
hybrydyzacja kwasów nukleinowych
izolacja i analiza RNA
Fakultet składa się z dwóch bloków ćwiczeń.
Pierwszy blok to kilka podstawowych technik współczesnej biologii molekularnej,
takich jak izolowanie DNA,
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)