Notatka porusza między innymi zagadnienia takie jak: Ponieważ zaczęto sekwencjonować genom człowieka zaszła potrzeba opracowania zupełnie nowej metody, nie opartej już na sekwencjonowaniu Sangera. Metoda Sangera wymagała bardzo dużo czasu i była kosztowna. Nowe technologie są znaczeni szybsze; są t...
TRAWIENIE WEKTORA, ENZYMY RESTRYKCYJNE 1. enzymy restrykcyje (jak działają, czego potrzebują do swojej aktywności, definicja jednostki aktywności, warunki przechowywania i ich konsekwencje, aktywność gwiezdna, jak zatrzymać reakcje tra...
ROZWIĄZANIA by A.T. Tu są skopiowane p ytania z wszystkich wcześniejszych plików i w całości rozwiązane przeze mnie (bo z częścią odpowiedzi się nie zgadzałam). Wg mnie to są prawidłowe odpowiedzi. 1. Pirosekwencjonowanie: a) jednorazowo sekwencjonuje się odcinki DNA krótsze niż przy zastosowan...
Wymaga precyzji w planowaniu końców DNA w miejscu ich styku. Wybór miejsca restrykcyjnego podyktowany obecnością specyficznej dla danego genu translacyjnej ramki odczytu- ORF (Open Reading Frame0 każda sek DNA lub RNA, która może podlegać t...
Łańcuchowa reakcja polimerazy (PCR- Polimerase Chain Reaction) 1987 Mullins, Nobel 1993 Przełom w technologii pozyskiwania i analizie dużej ilości fragmentów DNA Wykorzystuje naturalny proces replikacji- synteza komplementarnej nici DNA, ogra...
BIBLIOTEKI GENOMOWE I GENOWE Biblioteki genomowe: Kolekcja klonów z losowymi fragmentami heterologicznego DNA. reprezentują cały genom organizmu (co najmniej jedna kopia każdej sekwencji). Reprezentatywność tj prawdopodobieństwo znalezienia w niej klonu z konkretna sekwencją związana jest z rozmia...
Elektroforeza Jedna z podstawowych technik frakcjonowania cząsteczek obdarzonych ładunkiem elektrycznym (białka, peptydy, kwady nukleinowe, komórki). Podstawa innych technik m.in. hybrydyzacji, sekwencjonowania, PCR. Rozdział cząsteczek w ...
Narzędzia inżynierii genetycznej- enzymy Enzymy restrykcyjne (restryktazy)- endonukleazy bakteryjne. Hydroliza DNA przy ich użyciu to pkt wyjścia do innych technik IG. Powstałe frakcje DNA to substraty dla dalszych analiz, mają identyczne zakończenia (nie są losowe). Rozpoznają tzw sekwencje palind...
Geny reporterowe- markery IG Kodują białka, których obecność/ aktywność biochemiczną łatwo oznaczyć w komórce (in vivo) technikami biochemicznymi., autoradiografią, spektrofotometrią lub bio i chemiluminescencją. Łączone w fuzje z sekwencjami, kt...
Hybrydyzacja Efektywne narzędzie badawcze w diagnostyce molekularnej. Duża czułość, szerokie spektrum modyfikacji, relatywnie krótki czas. Technika oparta na tworzeniu stabilnych struktur dwuniciowych z cząsteczek wzajemnie komplementarnych. Kilkunastonukleotydowe odcinki DNA wystarczają by mogł...
