Analiza żywności Sprawozdanie Oznaczenie zawartości białka różnymi metodami. 1. Ćwiczenie A. Oznaczenie zawarto ści białka metodą Kjeldahla Oznaczenie składa się z dwóch etapów. I etap jest to mineralizacja próbki w środowisku stężonego H 2 SO 4 . Azot białkowy w tych warunkach przekształca się do jonu amonowego. II etap to alkalizacja jonu, a następnie destylowanie powstałego amoniaku. Amoniak jest oznaczany alkacymetryczne. V HCl =3,8 cm 3 c HCl =0,1M próbka 4 ryba 175,3 mg 1 cm 3 0,1 M HCl— 0,0014 g N
3,8 cm 3 0,1 M HCl — x g N
0,00532 g N— 0,1753 g ryby
x g N — 100 g ryby
% zawartość azotu w 100 g produktu
3,03% * 6,25 =18,94 %
Ryby są bogatym źródłem białka- jego zawartość mieści się w przedziale od 16% do 24% w zależności od gatunku ryby (choć ta wartość jest zmienna w zależności od źródła informacji). Nasz wynik mieści się danym przedziale. Zawartość tłuszczu w badanej próbce jest dość wysoka, co wskazuje, że była pobrana z ryby zawierającej mało tłuszczu (pstrąg, szczupak, dorsz). Duża zawartość białka może wskazywać na to, że w rybie znajdowały się aminokwasy zasadowe. Często występującym aminokwasem zasadowym w rybach jest lizyna. B. Oznaczenie zawarto ści białka rozpuszczalnego metodą biuretową. Metoda polega na powstaniu barwnych kompleksów wyniku wytworzenia się wiązania koordynacyjnego między Cu 2+ i atomami azotu dwóch przyległych wiązań peptydowych w środowisku zasadowym. Próbka 8 Schemat rozcieńczeń
x mg 10 cm 3 R=10
1 cm 3 Zawartość albuminy [mg] A 1 A 2 1
0,080
0,108
2
0,140
0,216
3
0,261
0,245
4
0,284
0,288
5
0,106
0,305
Dzięki krzywej wzorcowej sprawdziłam czy spełnione jest prawo Lamberta-Beera (zależność absorbancja od stężenia albuminy ma charakter prostoliniowy).
R 2 =0,8776
Współczynnik determinacji jest mniejszy, od 0,98, co wskazuje, że krzywa nie spełnia prawa Lamberta -Beera. Jest to wynik dużych różnic w absorbancj dla poszczególnych probówek. Odchylenia niektórych punktów mogą wynikać z niedokładnego odmierzania roztworów, a także niedokładnego wyzerowania próby ślepej. W mieszaninie reakcyjnej może także znajdować się inna substancja (absorbująca taka samą długość fali), która będzie fałszować wynik. y=0,0565x-0,0573 - równanie funkcji
(…)
…
Podczas oznaczania białka w różnych roztworach i różnymi sposobami mogły pojawić się błędy pomiaru, które wynikły z:
Nie dokładnego odmierzenia,
Złego odczytu z biurety podczas miareczkowania,
Nie dokładnej mineralizacji.
…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)