To tylko jedna z 5 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Paulina Krzemińska 14.12.2011r.
Opis doświadczenia 7: Lecytyny i cholesterol z żółtka jaja kurzego - izolacja i wykrywanie.
Etapy procesu izolacji:
Oddzieliłam żółtko od białka, a następnie zalałam żółtko mieszaniną etanol-eter dietylowy. Etanol spowodował denaturację pozostałości białka, natomiast w eterze rozpuściły się lipidy.
Odsączyłam zawiesinę na sączku karbowanym do kolby kulistej, po to aby pozbyć się zdenaturowanego białka i aby oczyścić roztwór lecytyn, kefalin i cholesterolu. Odparowałam eter dietylowy - część zatężonego roztworu zachowałam do analizy chromatograficznej (2).
Wkropliłam zatężony roztwór do zlewki z acetonem w celu wydobycia lecytyn i kefalin. Następnie osad lecytyn i kefalin odsączyłam na sączku karbowanym i część osadu zachowałam do analizy na płytce TLC (X); zachowałam także część przesączu do analizy TLC.
Pozostałą część osadu rozpuszczam w etanolu, po czym dodaję etanolowego roztworu chlorku kadmu, aby oddzielić kefaliny i lecytyny - lecytyna tworzy krystaliczny kompleks z CdCl2(3).
Odsączyłam kompleks lecytyn na sączku karbowanym do kolby kulistej, a następnie odparowałam rozpuszczalnik i pobrałam część osadu kompleksu lecytyny z CdCl2 do analizy chromatograficznej.
Chromatografia cienkowarstwowa TLC:
Następujące próbki nanoszę na szklane płytki pokryte żelem krzemionkowym:
W - wzorzec cholesterolu w chloroformie;
2 - wydzielone lecytyny, kefaliny i cholesterol;
X - surowy osad lecytyn i kefalin;
3 - kompleks lecytyn z CdCl2;
4 - pozostałość po wydzieleniu lecytyn.
Każdą z płytek rozwijam w dwóch układach:
- chloroform-MeOH-woda 65:25:4
- toluen-octan etylu 7:3
Następnie wywołuję płytki w następujący sposób:
spryskanie 0,1% roztworem ninhydryny w etanolu i wysuszeniu w piecu w 120 oC.
Spryskanie ninhydryną służy wykryciu wolnych grup aminowych.
umieszczenie płytki w komorze z jodem.
W ten sposób wykrywa się wiązania podwójne nienasyconych kwasów tłuszczowych. Plamki mają brunatny kolor na żółtym tle.
spryskanie 5% roztworem kwasu siarkowego i wysuszeniu w piecu w 120 oC.
Kwas siarkowy barwi cholesterol na kolor ciemnoczerwony.
Opracowanie wyników chromatografii:
Wywoływacz: ninhydryna
Układ: chloroform-metanol-woda
Obserwacje:
W
2
X
3
4
Plamki / wartości Rf
-
Rf1=0,47
Rf2=0,17
Rf1=0,47
Rf2=0,20
Rf1=0,45
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)