To tylko jedna z 4 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Biochemia – sprawozdanie 11 Izolowanie fosfolipidów i cholesterolu Opis doświadczenia Odważamy 8 g preparatu suszonego żółtka jaja kurzego i umieszczamy w zlewce o poj. 100 ml, wrzucamy sztabkę mieszającą i wlewamy 30 cm3 metanolu Całość mieszamy w mieszadle przez 10 min, czekamy aż osad osiądzie na dnie zlewki i zlewamy delikatnie roztwór znad osadu do kolby okrągłodennej o poj. 250 cm3 Połączone w kolbie ekstrakty odparowujemy na wyparce rotacyjnej Frakcje cholesterolową rozpuszczamy w 8 ml chloroformu, rozlewamy po 1 cm3 do sześciu probówek i przeprowadzamy próby w celu przeprowadzenia reakcji probówkowej na obecność cholesterolu Próba Salkowskiego; do probówki zawierającej 1 cm3 chloroformowego roztworu cholesterolu dodajemy powoli, po ściance 1 ml stężonego kwasu siarkowego silnie wstrząsając probówką. Próba Liebermana- Burcharda; do ok. 1 cm3 chloroformowego roztworu cholesterolu dodajemy 10 kropli bezwodnika octowego i kroplę stężonego kwasu siarkowego. Próba Windausa: do 1 ml chloroformowego roztworu choesterolu dodajemy kroplami roztwór bromu w lodowatym kwasie octowym. Obserwujemy zanikanie barwy bromu. Obserwacje Po rozdzieleniu niemieszających się cieczy w próbie Salkowskiego warstwa kwasu zabarwia się na żółto z zieloną fluorescencją, a warstwa chloroformowa po pewnym czasie barwi się na kolor brunatno-czerwony. W próbie Liebermana-Burcharda warstwa chloroformowa barwi się na kolor niebieski, następnie na zielony. W próbie Windausa obserwujemy zanikanie barwy bromu. Wnioski Próba Liebermana-Burcharda jest podstawą ilościowego oznaczania cholesterolu. Obliczenia • Próba lecytyna kefalina (eluent: CH3(CH2)4CH3 : CH3COCH3 2:1): b = 5,4 cm lecytyna a = brak kefalina a = 2,5 cm Frakcja fosfolipidowa a1 = brak a2 = 2,7 • Próba lecytyna kefalina (eluent: CHCl3 : CH3OH : H2O 90:25:4) b = 4,5 cm lecytyna a = 0,8 kefalina a = 1,8 cm Frakcja fosfolipidowa a1 = 1,7 cm a2 = 1,6 cm Wzory; Lecytyna Kefalina Cholesterol pierwsza płytka jest robiona przez Dawida a druga (na dole) przeze mnie. Dotyczą tego samego wiec wybierzcie które chcecie. Jest to chromatografia cienkowarstwowa dla frakcji fosfolipidowej gdzie eluentem byl heksan:aceton 2:1 .
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)