Izolowanie fosfolipidów i cholesterolu

Nasza ocena:

5
Pobrań: 595
Wyświetleń: 4053
Komentarze: 0
Notatek.pl

Pobierz ten dokument za darmo

Podgląd dokumentu
Izolowanie fosfolipidów i cholesterolu - strona 1 Izolowanie fosfolipidów i cholesterolu - strona 2 Izolowanie fosfolipidów i cholesterolu - strona 3

Fragment notatki:


Biochemia – sprawozdanie 11                     Izolowanie fosfolipidów i cholesterolu    Opis doświadczenia    Odważamy 8 g preparatu suszonego żółtka jaja kurzego i umieszczamy w  zlewce o poj. 100 ml, wrzucamy sztabkę mieszającą i wlewamy 30 cm3 metanolu  Całość mieszamy w mieszadle przez 10 min, czekamy aż osad osiądzie na dnie  zlewki i zlewamy delikatnie roztwór znad osadu do kolby okrągłodennej o poj. 250 cm3   Połączone w kolbie ekstrakty odparowujemy na wyparce rotacyjnej   Frakcje cholesterolową rozpuszczamy w 8 ml chloroformu, rozlewamy po 1  cm3 do sześciu probówek i przeprowadzamy próby w celu przeprowadzenia reakcji  probówkowej na obecność cholesterolu  Próba Salkowskiego;  do probówki zawierającej 1 cm3 chloroformowego  roztworu cholesterolu dodajemy powoli, po ściance 1 ml stężonego kwasu siarkowego  silnie wstrząsając probówką.   Próba Liebermana- Burcharda; do ok. 1 cm3 chloroformowego roztworu  cholesterolu dodajemy 10 kropli bezwodnika octowego i kroplę stężonego kwasu  siarkowego.   Próba Windausa:  do 1 ml chloroformowego roztworu choesterolu dodajemy  kroplami roztwór bromu w lodowatym kwasie octowym. Obserwujemy zanikanie barwy  bromu.     Obserwacje Po rozdzieleniu niemieszających się cieczy w próbie Salkowskiego warstwa kwasu zabarwia  się na żółto z zieloną fluorescencją, a warstwa chloroformowa po pewnym czasie barwi się na  kolor brunatno-czerwony. W próbie Liebermana-Burcharda warstwa chloroformowa barwi się  na kolor niebieski, następnie na zielony. W próbie Windausa obserwujemy zanikanie barwy  bromu.      Wnioski Próba Liebermana-Burcharda  jest podstawą ilościowego oznaczania cholesterolu.   Obliczenia • Próba lecytyna kefalina (eluent: CH3(CH2)4CH3 : CH3COCH3 2:1):  b = 5,4 cm lecytyna a = brak kefalina a = 2,5 cm Frakcja fosfolipidowa a1 = brak a2 = 2,7 • Próba lecytyna kefalina (eluent: CHCl3 : CH3OH : H2O 90:25:4) b = 4,5 cm lecytyna a = 0,8 kefalina a = 1,8 cm Frakcja fosfolipidowa a1 = 1,7 cm a2 = 1,6 cm  Wzory; Lecytyna    Kefalina Cholesterol pierwsza płytka jest robiona przez Dawida a druga (na dole) przeze mnie. Dotyczą tego  samego wiec wybierzcie które chcecie. Jest to chromatografia cienkowarstwowa dla frakcji  fosfolipidowej gdzie eluentem byl heksan:aceton 2:1 . ... zobacz całą notatkę

Komentarze użytkowników (0)

Zaloguj się, aby dodać komentarz