Enzymatyczne metody oznaczanai sacharydów - wykład

Metody enzymatyczne Metody enzymatyczne stosuje się głównie do oznaczania glukozy i fruktozy, przy czym w przypadku glukozy korzysta się najczęściej z oksydazy glukozowej lub dehydrogenazy glukozo-6-fosforanu. Metoda z oksydazą glukozową  – w obecności tlenu oksydaza glukozowa katalizuje utlenianie β-D-glukozy do D-glukono-δ-laktonu. Jednocześnie następuje redukcja koenzymu FAD do FADH2 i ponowne utlenienie do FAD, któremu towarzyszy przeniesienie atomów wodoru na tlen cząsteczkowy i powstanie nadtlenku wodoru (H2O2). Powstały H2O2, w obecności związku będącego donorem atomów wodoru np. di- o -anizydyny, jest rozkładany przez peroksydazę, a odwodorowany związek staje się barwny (np. żółty w przypadku di- o -anizydyny). Metoda z dehydrogenazą glukozo-6-fosforanową –  glukozo-6-fosforan reaguje z NADP+, który w obecności dehydrogenazy fosforoglukonianowej jest przekształcany w NADPH. Ilość powstałego NADPH jest proporcjonalna do ilości glukozy i oznaczana spektrofotometrycznie. Metody enzymatyczne stosuje się przede wszystkim do oznaczania glukozy, galaktozy, sacharozy, laktozy i skrobi w produktach spożywczych, np. w miodzie. ... zobacz całą notatkę