Wyznaczenie optymalnego stężenia preparatu - sprawozdanie nr2

Wyznaczenie optymalnego stężenia preparatu enzymatycznego Przygotowano dwa rozcieńczenia 50 i 100-krotne otrzymanego na poprzednich ćwiczeniach preparatu inwertazy. Do probówki z 3ml roztworu enzymu dodano 3 ml 0.2 M roztworu sacharozy w buforze octanowym o pH 4,7. Natychmiast po wymieszaniu (próba odczynnikowa), a następnie po 5, 10, 15 i 30min.pobierano po 1ml mieszaniny inkubacyjnej do probówek zawierających po 4 ml buforu glicynowego o pH 10 (w celu zatrzymania reakcji enzymatycznej). Po wymieszaniu, z każdej z tych probówek przeniesiono do odpowiednio oznakowanych probówek zawierających 1ml świeżo przygotowanej mieszaniny odczynników Somogyi I i II. Probówki szczelnie zatkano i ogrzewano przez 15min. we wrzącej łaźni wodnej. Po ostudzeniu dodano po 1ml odczynnika Nelsona, wymieszano na mico-shakerze do ustania wydzielania się pęcherzyków gazu, dodano 2 ml wody destylowanej spłukując ścianki probówek. Po dokładnym wymieszaniu odczytano absorbancję przy dł.fali 520nm wobec próby odczynnikowej. Rozcieńczenie: 1. 50-krotne 2. 100-krotne czas [min] A520 czas [min] A520 5 0,343 5 0,328 10 1,04 10 0,608 15 1,218 15 0,756 30 1,56 30 1,080 Rozcieńczenia przygotowano, aby określić, które wcześniej przygotowane rozcieńczenie preparatu inwertazy będziemy stosować w następnych ćwiczeniach. Odpowiednim rozcieńczeniem będzie 60-krotne rozcieńczenie inwertazy, ponieważ uzyskiwane wyniki wartości absorbancji powinny mieścić się w wiarygodnym zakresie krzywej kalibracyjnej. ... zobacz całą notatkę