Badanie wpływu pH i rodzaju buforu na aktywność inwertazy. Przygotowano 7 probówek zawierających po 3 ml 0,2 M roztworu sacharozy w buforze Mc Ilvaine'a o następujących wartościach pH: 2, 3, 4, 4.8, 6, 7, 8, 4.7 (bufor octanowy). Do każdej probówki dodano po 3ml roztworu rozcieńczonego preparatu enzymatycznego, zawierającego inwertazę. Natychmiast po wymieszaniu (próby odczynnikowe), a następnie po 5, 10, 15 i 30 min. pobierano po 1ml mieszaniny inkubacyjnej do odpowiednio oznakowanych probówek zawierających po 4ml 0,1 M buforu glicynowego o pH 10 (w celu zatrzymania reakcji enzymatycznej). Dalsza procedura jest analogiczna do zastosowanej przy wyznaczaniu optymalnego stężenia preparatu enzymatycznego. Wartości absorbacji przy dł.fali 520 nm: pH / czas [min]
5
10
15
30
2
0,364
0,479
0,520
0,687
3
0,456
0,366
0,611
1,557
4
0,369
0,855
1,275
2,093
4,8
0,349
0,889
1,173
2,135
6
0,240
0,601
0,908
1,867
7
0,108
0,271
0,465
0,972
8
-0,084
0,011
0,020
0,073
4,7 (bufor oct)
0,347
1,012
1,358
3,311
Obliczanie ilości produktu [ mg ] :
Cp = Apróby * F * 1ml * 30 F = 43,53 pH / czas
5
10
15
30
2
0,475
0,625
0,678
0,897
3
0,595
0,477
0,797
2,033
4
0,482
1,117
1,664
2,733
4,8
0,456
1,161
1,532
2,788
6
0,313
0,785
1,185
2,437
7
0,141
0,354
0,607
1,269
8
-0,110
0,014
0,026
0,095
4,7 (bufor oct)
0,453
1,322
1,773
4,324
Obliczanie V0 :
tg α0 = V0
V0= ilość produktu/czas
pH2 V0 =0,475/5= 0,095 pH3 V0 = 0,48/ 10 = 0,048 pH4 V0 = 1,12/10 = 0,112
pH4,8 V0 = 1,16/10 = 0,116
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)