To tylko jedna z 5 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Celem ćwiczeń z przedmiotu Techniki Biologii Molekularnej w Hodowli Zwierząt jest umożliwienie studentom 3 roku kierunku bioinformatyka zdobycia doświadczenia w użyciu niektórych metod i technik biologii molekularnej wykorzystywanych w hodowli zwierząt gospodarskich. Metody i techniki użyte podczas ćwiczeń to: izolacja DNA, łańcuchowa reakcja polimerazy (PCR), trawienie enzymem restrykcyjnym, rozdział elektroforetyczny w żelu agarozowym. Podczas zajęć student wyizoluje DNA z próbki mleka. Następnie przeprowadzi analizę ilościową i jakościową DNA zawartego w próbie za pomocą spektrofotometru. Następnie DNA zostanie użyte jako matryca do serii reakcji PCR, który amplifikuje jako polimorficzny marker DNA (wcześniej został on opisany w genomie bydlęcym). Markery te będą genotypowane poprzez cięcie enzymem restrykcyjnym i rozdzielone na żelu agarozowym. Podsumowaniem zajęć będzie analiza wyników i porównanie ich z wynikami pozostałych osób w grupie oraz z wynikami z publikacji. SPRAWOZDANIE Jednym z elementów oceny końcowej będzie napisanie krótkiego raportu badawczego na podstawie wyników otrzymanych podczas ćwiczeń. Powinien on być napisany na wzór publikacji i zawierać: 1. Tytuł – zwięzły i czytelny; 2. Streszczenie – 10% całości raportu; 3. Wstęp – max. 1 strona; 4. Materiał i metody – max. 2 strony; 5. Wyniki i Dyskusja – max. 2 strony; można dołączyć tabele, zdjęcia, wykresy; 6. Podsumowanie – max. 1 strona; 7. Literatura – minimum 3 pozycje. Wstęp Do tej pory postęp w hodowli zwierząt opierał się na wiedzy z zakresu genetyki cech ilościowych, nauk o żywieniu zwierząt oraz biotechnik rozrodu. Osiągnięcia genetyki molekularnej stwarzają nadzieję na dalszy postęp w hodowli zwierząt poprzez identyfikację genów determinujących cechy ilościowe zwierząt. W hodowli zwierząt po raz pierwszy zastosowano techniki biologii molekularnej w celu badania białek mleka w latach 50-tych XX wieku. Obecnie uznanymi markerami są geny kodujące białka mleka – kazeiny i białka serwatki, mające znaczący wpływ na skład chemiczny i jakość mleka krów. Z technologicznego punktu widzenia najbardziej pożądane jest mleko o zwiększonym udziale kappakazeiny, ze względu na wyższą wydajność serowarską i lepsze parametry technologiczne. Jej zawartość w mleku krowim waha się w granicach 2,4-2,6% i stanowi ona ok. 78-85% ogółu białek mleka.
(…)
… i innych komponentów wewnątrzkomórkowych do roztworu. Zazwyczaj równolegle
prowadzi się inaktywację nukleaz komórkowych za pomocą enzymów proteolitycznych (np. proteinazy K),
aby zabezpieczyć DNA przed ich degradującym działaniem. Kolejnym krokiem jest oddzielnie kwasu
nukleinowego od białek oraz od pozostałych rozpuszczalnych komponentów komórkowych. Ostatnim
etapem jest wytrącanie DNA poprzez dodanie roztworu…
… laboratoryjny
- pipety: P-20, P-200, P-1000
- końcówki do pipet: P-20, P-200, P-1000
- probówki o pojemności 1,5 ml
Zanim przystąpisz do izolacji przygotuj:
Próby: próby świeżego mleka należy odtłuścić poprzez wirowanie przez 15 minut przy 3000
obr./min. w temperaturze 4oC, a następnie zebrać tłuszcz. Tak przygotowane chude mleko może
zostać zamrożone w temperaturze – 20oC gotowe do izolacji DNA.
Bufor…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)