To tylko jedna z 2 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Oznaczenia zaw. sacharozy glukozy i fruktozy + reakcje Do oznaczania zawartości poszczególnych cukrów w mieszaninach soków najczęściej stosuje się metody chromatograficzne i enzymatyczne. Otrzymane ilości sacharozy, glukozy i fruktozy oraz obliczone stosunki zawartości glukozy do zawartości fruktozy porównuje się ze standardami, np. zawartymi w Kodeksie Praktyki. Wskaźnikiem dodatku cukru bądź nie deklarowanego soku są odchylenia od ustalonych norm.
Zasada metody
Zawartość D-glukozy jest oznaczana przed i po enzymatycznej hydrolizie sacharozy. Zawartość D-fruktozy jest oznaczana po oznaczeniu D-glukozy.
Oznaczanie D-glukozy przed inwersją
W pH 7,6 enzym heksokinaza (HK) katalizuje fosforylację D-glukozy przy udziale adenozyno-5-trójfosforanu (ATP) z wytworzeniem adenozyno-5-dwufosforanu (ADP).
HK
D-glukoza + ATP → G-6-P + ADP
W obecności dehydrogenazy glukozo-6-fosforanu (G6P-DH), powstały D-glukozo-6-fosforan (G6P-P) jest specyficznie utleniany za pomocą fosforanu dinukleotydu nikotynamido-adeninowego (NADP) do D-glukonianu-6-fosforanowego z wydzieleniem zredukowanego fosforanu dinukleotydu nikotynamido-adeninowego (NADPH).
G6P-DH
G-6-P + NADP+ → D-glukonian-6-fosforanowy + NADPH + H+ Ilość wydzielonego NADPH mierzona absorbancją roztworu przy długości fali 365 nm odpowiada zawartości D-glukozy.
Oznaczanie D-fruktozy
Heksokinaza katalizuje również fosforylację D-fruktozy do fruktozo-6-fosforanu (F-6-P) za pomocą ATP.
HK
D-fruktoza + ATP → F-6-P + ADP
Po zakończeniu reakcji F-6-P ulega konwersji do G-6-P przy udziale izomerazy fosfoglukozowej (PGI).
PGI
F-6-P → G-6-P
G-6-P reaguje ponownie z NADP z wytworzeniem D-glukonianu-6-fosforanowego i NADPH. Ilość wydzielonego NADPH odpowiada zawartości D-fruktozy.
Zawartości sacharydów obliczyć ze wzoru:
w którym:
c - zawartość sacharydu [g/dm3],
V - objętość końcowa - sacharoza, D-glukoza - 3,020 cm3, D-fruktoza 3,040 cm3,
v - objętość próby [cm3], MW - masa molowa oznaczanego sacharydu - sacharoza - 342,3 g/mol, D-glukoza, D-fruktoza - 180,16 g/mol,
d - droga światła [cm],
ε - współczynnik absorbancji NADH - przy 365 nm = 3,5,
A - różnica absorbancji,
r - rozcieńczenie.
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)