To tylko jedna z 3 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
KURS PODSTAWOWY
Ćwiczenie 1-4
Metody stosowane w biologii komórki
Część teoretyczna:
Rodzaje, zasada działania i zastosowanie mikroskopów optycznych:
mikroskop świetlny jasnego pola
mikroskop kontrastowo-fazowy
mikroskop ciemnego pola
mikroskop fluorescencyjny
mikroskop konfokalny
Mikroskop elektronowy transmisyjny i skaningowy
etapy przygotowania materiału biologicznego do obserwacji w mikroskopie
zasada działania
interpretacja elektronogramów
Metody cyto- i histochemiczne:
specyfika metod cyto- i histochemicznych
metody przyżyciowe i ich zastosowanie
etapy przygotowania preparatu do obserwacji w mikroskopie świetlnym (podstawy techniki histologicznej); przykłady utrwalaczy, substancji utwardzających i barwników
cechy produktu reakcji cytochemicznych
Zasada i zastosowanie metod:
autoradiografii
immunocytochemii(produkcja przeciwciał monoklonalnych).
hybrydocytochemii
Metody biochemiczne:
specyfika metod biochemicznych
spektrofotometria- zasada działania i zastosowanie
przykłady innych metod biochemicznych
Część praktyczna:
Obserwacja nie barwionych komórek roślinnych i zwierzęcych w mikroskopie świetlnym jasnego pola.
1. Wykonaj preparaty mikroskopowe z komórek roślinnych, umieszczając na szkiełku przedmiotowym w kropli wody następujące tkanki:
Skórkę łuski spichrzowej cebuli jadalnej (Allium cepa)
Skórkę ze spodniej strony liścia trzykrotki (Tradescantia) Uwaga: preparaty zachowaj do późniejszych obserwacji w mikroskopie fluorescencyjnym.
Przeprowadź obserwacje wykonanych preparatów w mikroskopie świetlnym, przy powiększeniu obiektywu 5 x, 10 x i 40 x. Wykonaj rysunki zaobserwowanych komórek. Napisz w zeszycie, jakie struktury komórek roślinnych można zaobserwować w nie barwionym preparacie mikroskopowym. 2. Obejrzyj niebarwione preparaty komórek zwierzęcych. W tym celu:
Wykonaj nie barwiony preparat z komórek nabłonka jamy ustnej Wykonanie preparatu:
- drewnianą szpatułką pobierz wymaz z wewnętrznej strony policzka
- zrób rozmaz pobranych komórek na szkiełku przedmiotowym
- na preparat nanieś kroplę PBS (zbuforowany roztwór soli fizjologicznej) i przykryj szkiełkiem nakrywkowym
Obejrzyj niebarwiony rozmaz komórek krwi człowieka
Przeprowadź obserwacje wykonanych preparatów w mikroskopie świetlnym, przy powiększeniu obiektywu 5 x, 10 x i 40 x. Wykonaj rysunki zaobserwowanych komórek. Napisz w zeszycie, jakie struktury komórek zwierzęcych można zaobserwować w nie barwionym preparacie mikroskopowym.
(…)
… preparacie mikroskopowym. Obserwacje komórek w mikroskopie fluorescencyjnym
Obserwacja zjawiska autofluorescencji
Obserwacja autofluorescencji chlorofilu
Wykonaj preparat w kropli wody ze skórki spodniej strony liścia trzykrotki (Tradescantia) zaobserwuj w mikroskopie fluorescencyjnym autofluorescencję chlorofilu.
Zastosowanie barwników fluorescencyjnych
Wykrywanie kalozy w tkankach roślinnych za pomocą błękitu aniliny
Błękit aniliny nie jest fluorochromem i jako taki fluorescencji nie daje. Fluorescencja pojawia się dopiero po połączeniu błękitu aniliny z kalozą (mechanizm tej reakcji nie jest wyjaśniony).
Odczynniki:
Błękit aniliny (rozpuszczalny w wodzie)
1 M roztwór glicyny o pH 9.5
Przygotować 0,005% roztwór błękitu aniliny w 1 M roztworze glicyny o pH 9.5
Wykonanie preparatu:
Preparaty z wewnętrznej skórki okrywowej łuski cebuli wykonać tak jak w poprzednich ćwiczeniach.
Zbadać autofluorescencję komórek skórki cebuli.
Zbadać fluorescencję komórek skórki cebuli po traktowaniu błękitem aniliny, zwracając uwagę na świecenie kalozy plazmodesmowej.
Wykonaj w zeszycie rysunki i wyciągnij wnioski z przeprowadzonych obserwacji.
Barwienie przyżyciowe
Barwienie przyżyciowe czerwienią obojętną…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)