Barwienie drobnoustrojów - omówienie

Nasza ocena:

5
Pobrań: 504
Wyświetleń: 1561
Komentarze: 0
Notatek.pl

Pobierz ten dokument za darmo

Podgląd dokumentu
Barwienie drobnoustrojów - omówienie - strona 1 Barwienie drobnoustrojów - omówienie - strona 2 Barwienie drobnoustrojów - omówienie - strona 3

Fragment notatki:


MIKROBIOLOGIA ĆWICZENIE  Barwienie drobnoustrojów Bakterie posiadają małą zdolność załamywania promieni świetlnych, dlatego są słabo widoczne w  zwykłym mikroskopie świetlnym. Ich obserwacja jest możliwa dopiero po wybarwieniu.  Barwniki są związkami chemicznymi zdolnymi do reagowania z barwionymi substancjami, dając  trwałe, barwne połączenia. Większość barwników używanych w mikrobiologii to aniliny, pochodne  benzenu. W cząsteczkach tych związków wyróżniamy grupę chromoforową (barwną) (np. grupy – azo,   -nitrozo,   -azoksy,   tiokarbonylową)   i   grupę   auskochromową   zdolną   do   tworzenia   soli   z  barwionym substratem (np. grupy –NH2, -OH).     np. chlorek błękitu metylenu = błękit metylenu+ + Cl- Jeżeli chromofor jest jonem dodatnim, barwnik nazywamy zasadowym (błękit metylenowy, fiolet  krystaliczny, fiolet goryczkowy, fuksyna zasadowa). W barwnikach kwaśnych chromofor jest jonem  ujemnym (eozyna, fuksyna kwaśna, nigrozyna).  Wyróżniamy następujące sposoby barwienia bakterii:  a) proste, w których preparat barwi się przy pomocy jednego barwnika i wszystkie bakterie są  zabarwione podobnie b) barwienie   złożone,   w   których   używa   się   wielu   barwników   i   bakterie   reagują   na   różne  barwniki w innych sposób 1. Barwienie proste Barwienie pozytywne polega na zabarwieniu w preparacie komórek drobnoustrojów, zaś barwienie  negatywne   opiera   się   na   uwidocznieniu   otoczenia,   nie   zaś   obiektu.   W   dobrze   wybarwionym  preparacie „pozytywnym”  będziemy obserwować obiekt na jasnym tle, natomiast w preparacie  „negatywnym” wybarwia się tło, a komórki pozostają jasne.  1.1 Barwienie proste pozytywne    Przed   rozpoczęciem   barwienia   należy   przygotować   i   utrwalić   preparat.   Preparat   wykonuje   się  poprzez rozprowadzenie zawiesiny bakterii na szkiełku podstawowym, które następnie suszy się na  powietrzu.   Utrwalenia   materiału   dokonuje   się   za   pomocą   czynników   fizycznych   (ogrzewanie  szkiełka z suchym preparatem w płomieniu palnika gazowego, umieszczenie w temp. 60oC przez 10  min) lub chemicznych (alkohol etylowy, metylowy, formalina, pary kwasu osmowego). Utrwalenie  materiału   ma   na   celu   zabicie   obecnych   w   nich   mikroorganizmów,   a   tym   samym   ułatwienie  wnikania barwnika do ich wnętrza. Utrwalenie powoduje denaturacje enzymów bakteryjnych, co  zapobiega   rozkładaniu   przez   nie   struktur   komórkowych   tzw.   autolizie.   Utrwalenie   zwiększa 

(…)

…. Wykonaj rozmaz i obserwacje według punktów 2-4
9. Wytrzyj olejek immersyjny z obiektywu
2. Barwienie złożone
2.1. Barwienie metodą Grama
Barwienie metodą Grama jest barwieniem złożonym, różnicującym, które w praktyce pozwala na
identyfikacje i klasyfikacje bakterii na Gram-dodatnie i Gram-ujemne. Barwienie Grama zostało
opracowane przez Krystiana Grama w 1884 roku, kiedy podczas prób wybarwienia bakterii
zauważył, że niektóre z nich tracą kolor, przy próbach wypłukania nadmiaru barwnika.
Technika barwienia Grama składa się z następujących czynności:
1. Barwienie podstawowe roztworem fioletu krystalicznego. Wszystkie bakterie zostają
wybarwione na fioletowo pod wpływem tego barwnika zasadowego.
2. Utrwalenie płynem Lugola (roztwór jodu w jodku potasu). Jodyna w połączeniu z fioletem
krystalicznym tworzy…
… pożywki przy jej kontakcie z ezą, oznacza że ma zbyt wysoką
temperaturę; wysterylizuj ezę jeszcze raz i zacznij od początku. Rozprowadź
równomiernie komórki w kropli wody; rozmaz powinien wyglądać jak rozcieńczone
mleko; po przygotowaniu rozmazu ponownie wysterylizuj ezę
b) w drugim okręgu przygotuj rozmaz Bacillus megaterium; nie używaj wody,
ponieważ bakterie są już zawieszone w płynie; zamieszaj…
… nie rozlała się na szkiełku
2. Używając brzegu drugiego szkiełka podstawowego, rozprowadź kroplę po powierzchni
szkiełka, tak by uzyskać rozmaz o różniej grubości (w skali od czarnego do szarego);
grubość rozmazu będzie zależeć od kąta ustawienia szkiełka podczas rozprowadzenia
preparatu
3. Pozostaw preparat do całkowitego wyschnięcia; nie należy utrwalać preparatu przy
pomocy podgrzewania
4. Przeprowadź…
… w komórkach kompleksy krystaliczne fiolet-jodyna.
3. Odbarwienie (alkohol etylowy, lub mieszanina alkohol etylowy-aceton). Pierwotne
barwienie fioletem krystalicznym zostaje wymyte u niektórych bakterii, inne pozostają
zabarwione.
4. Dobarwienie barwnikiem kontrastowym (fuksyna karbolowa, safranina). Ten barwnik
zasadowy powoduje ponowne wybarwienie na czerwono (safranina) lub na różowo
(fuksyna) bakterii…
… fiolet-jodyna (jod zastępuje w cząsteczce atomy
chloru). U bakterii Gram-ujemnych czynnik odbarwiający (etanol) rozpuszcza warstwę plastyczną
ściany komórkowej, poprzez wypłukanie z niej fosfolipidów, i kryształy wymywane są poprzez
cienką warstwę peptydoglikanu. Ściana bakterii Gram-dodatnich po wpływem etanolu zostaje
dodatkowo uszczelniona. Alkohol działając na wiele warstw peptydoglikanu powoduje…
... zobacz całą notatkę



Komentarze użytkowników (0)

Zaloguj się, aby dodać komentarz