To tylko jedna z 3 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Identyfikacja bakterii: formy morfologiczne bakterii i kolonii Barwienie Barwienie jest to proces fizyko-chemiczny polegający na wniknięciu barwnika do wnętrza komórki mikroorganizmu i utworzeniu barwnego kompleksu z cytoplazmą lub wewnątrzkomórkowymi strukturami komórki. Barwienie ma na celu ułatwienie obserwacji cech morfologicznych i diagnostycznych komórek mikroorganizmów np. kształtu, wielkości, ułożenia komórek, zdolności ruchu, występowania i rozmieszczenia wici i rzęsek, obecności otoczek, a także sposobu rozmnażania przez podział, pączkowanie (wytwarzanie i ułożenie pączków), zarodnikowanie (ułożenie zarodników) oraz tworzenia i rozmieszczenia form przetrwanych w komórce. Typy barwienia Barwienie przyżyciowe – gdy na zywe komórki mikroorganizmów naniesione na szkiełko podstawowe działamy barwnikiem Barwienie preparatów utrwalonych – gdy barwieniu poddaje się utrwalone (martwe) komórki drobnoustrojów Utrwalanie Utrwalanie polega na termicznym lub chemicznym zabiciu mikroorganizmów i przytwierdzeniu ich do powierzchni szkiełka podstawowego. Celem utrwalania jest ułatwienie stosowanym barwnikom penetracji przez ścianę komórkową i ich wniknięcie do wnętrza komórki oraz odsłonięcie w ścianach komórkowych mikroorganizmów związków, z którymi wiążą się barwniki. Metody utrwalania: Chemiczna metoda utrwalania polega na naniesieniu na wysuszony rozmaz odpowiedniego odczynnika (np. formaliny, alkoholu, eteru). Po kilku minutach preparat wysycha i jest przygotowany do barwienia. Termiczna metoda utrwalania polega na 2-3-krotnym przeciągnięciu szkiełka podstawowego z wysuszonym rozmazem mikroorganizmów w płomieniu palnika. Szkiełko podczas utrwalania powinno być zwrócone rozmazem ku górze. Podział technik barwienia Barwienie proste: czyli monochromatyczne (jednobarwne) polega na zastosowaniu jednego barwnika do wizualizacji komórek mikroorganizmów (barwienie pozytywne) lub zabarwienia tła preparatu (barwienie negatywne). Barwienie złożone: czyli polichromatyczne (wielobarwne) polega na zastosowaniu dwóch lub więcej barwników w ściśle określonej kolejności. Barwienie proste • Barwienie proste pozytywne - polega na zabarwieniu komórek mikroorganizmów w formie utrwalonej z zastosowaniem jednego barwnika. Tło preparatu pobarwieniu pozostaje bezbarwne. Wykorzystujemy do tego celu głównie zasadowe barwniki anilinowe (błękit metylenowy, zieleń malachitowa, zieleń brylantowa, fuksyna zasadowa, czerwień obojętna, fiolet krystaliczny, goryczkowy i metylowy). Zasadowe barwniki wykazują silne powinowactwo do kwaśnej cytoplazmy wewnątrzkomórkowej
(…)
… na naniesieniu odbarwiacza (roztworu alkoholu lub mieszaniny
acetonu z alkoholem). Odbarwiacz wnika w warstwy mureiny bakterii powodując
dehydratację. W wyniku usunięcia wody następuje zagęszczenie sieci mureiny, a tym
samym zmniejszenie pustych przestrzeni w wielowarstwowych ścianach komórkowych.
Ponadto w wyniku działania odbarwiacza u bakterii Gram-ujemnych zniszczeniu ulega
zewnętrzna błona lipopolisacharydowa eksponując cienką warstwę mureiny. Kompleks
barwnika z jodem zostaje uwięziony pod zwartą i grubą warstwą mureiny w komórkach
bakterii Gram-dodatnich, natomiast z komórek bakterii Gram-ujemnych jest on łatwo
wymywany odbarwiaczem. Na tym etapie następuje właściwe zróżnicowanie komórek.
Komórki Gram-dodatnie z uwięzionym kompleksem barwnika nadal mają zabarwienie
fioletowe, podczas gdy komórki…
…, zwłaszcza w przypadku barwienia dotyczącego
bakterii gram-ujemnych, takich jak Haemophilus influenzae i bakterie z rodzaju Neisseria
Barwienie Grama
1) Fiolet krystaliczny jest zasadowym, słabo rozpuszczalnym barwnikiem, który
w roztworze tworzy kationy. Łatwo penetruje przez ścianę komórkową i
błonę cytoplazmatyczną bakterii Gram-ujemnych i Gram-dodatnich wnikając
do wnętrza komórki. Na tym etapie…
… fosfolipidów. Ponieważ kolor safraniny jest mniej intensywny niż fioletu
krystalicznego komórki Gram-dodatnie pozostają fioletowe. Bezbarwne komórki Gramujemne
zabarwione safraniną przyjmują kolor różowy.
…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)