Metody ilościowego oznaczania białek
• Metoda Kjeldahla- oznaczanie azotu bialkowego
Zawartość azotu w różnych białkach jest względnie stała i wynosi ok. 16%. Znając odsetek azotu w badanej próbie, można obliczyć, ile zawiera białka
• Metoda pomiaru absorbancji w UV
• Metoda biuretowa(Piotrowskiego)
Oznaczanie natężenia barwy powstałej w wyniku utworzenia związków kompleksowych białek z jonami miedzi (II) w środowisku zasadowym. Intensywnośd barwy w reakcji biuretowej jest proprocjonalna do liczby wiązao peptydowych. Aby ilościowy oznaczyc białko wykorzystuje się linowa zależność zmiany barwy od zawartości protein
• Metoda mikrobiuretowa
Podobna do biuretowej, rozni się dłg fal
• Metoda Lowrey`ego
Wykorzystuje się dwie rekacje:
1)Reakcję aminokwasów z odczynnikiem Folina:
Tyrozyna,tryptofan,cysteina oraz przypuszczalnie histydyna występujące w bialkach redukują jony Mo6+ /W6+zawarte w odczynniku Folina-Ciocalteau do niższych tlenków.( Gdy zmierzymy ile zostało zredukowanych jonow to bd wiedziec ile było bialka—chyba)
2) Reakcję biuretową:
Jony miedzi(II) tworzą kompleksowe połaczenia z wiązaniami peptydowymi,uczestniczą również w redukcji odczynnika Folina,przez co zwiększa się czułość reakcji
• Metoda Bradforda
W metodzie wykorzystuje się zdolność wiązania barwnika błękitu brylantowego - coomassie Brilliant Blue G-250 (CBB G250) z grupami aminowymi białek. Natezenie barwy jest proporcjonalne do ilości bialek w roztworze
• Metoda z kwasem bis-cynchoninowym (BCA)
W alkalicznym środowisku niektóre składniki białek (tyrozyna, tryptofan, cysteina, cystyna) redukują jony Cu2+ do Cu1+
• Cu1+ tworzą barwny kompleksowy związek z kwasem biscynchoninowym (BCA)
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)