Drożdżowe systemy ekspresyjne
1. Drożdże są dogodnymi systemami, ponieważ:
Szybko rosną
Osiągają znacznie większą biomasę niż org prokariotyczne (nawet 100 g sm/l hodowli)
Są zdolne do przeprowadzania modyfikacji posttranslacyjnych niezbędnych do prawidłowego funkcjonowania i białek pochodzących z org wyższych (np N i O-glikozylacji, tworzenia mostków disiarczkowych, dojrzewania proteolitycznego) - sfałdowania odpowiedniego białek
Posiadają zdolność do sekrecji białek do podłoża hodowlanego = eliminacja kilku etapów otrzymywania białek rekombinowanych niezbędnych w przypadku produkcji białek w bakteriach np lizy komórek i wieloetapowego oczyszczania
Przykładowo: u bakterii liza komórek jest łatwiejsza bo np. można do lizy użyć penicyliny, która będzie niszczyć ścianę komórkową bakterii, ale nie będzie wpływała na metabolizm komórki.
Jako pierwsze stosowano systemy drożdżowe S.cerevisiae np do:
Przemysłowej produkcji insuliny
HBsAg (białko S wirusa zapalenia wątroby typu B)
Niestety S.cerevisiae nie spełnia wymagań nowoczesnych biotach, gdyż:
Ma niski poziom produkcji i sekrecji białek
Brak jest stabilności plazmidów rekombinantowych
Często następuje hiperglikozylacja heterologicznych polipeptydów
Tylko nieliczne substraty są wykorzystywane jako źródło węgla i energii
Inne drożdżowe systemy ekspresyjne oparte są na:
Schizosaccharomyces pombe
Pichia pastoris
Pichia methanolica
Hansenula polymorpha
Yrrowia lipolytica
Najczęściej wykorzystywane na skalę przemysłową:
Pichia pastoris
Hansenula polymorpha
Wysoka wydajność zewnątrzkomórkowej produkcji białek heterologicznych (10 g/l pożywki)
S.cerevisiae:
Rekombinanty są najczęściej wykorzystywane do produkcji metabolitów niebiałkowych np etanolu z niekonwencjonalnych źródeł węgla np laktozy zawartej w serwatce.
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)