To tylko jedna z 2 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Mikrobiologia przemysłowa ćw 9
BIOSYNTEZA ACYLAZY PENICYLINOWEJ
Enzym hydrolizujący wiązanie amidowe w penicylinie prowadząc do otrzymania kwasu 6-AP
(kwas 6 - aminopenicylanowy). Dokładniej przeprowadza reakcję hydrolizy łańcucha
bocznego pierścienia beta – laktamowego. Kwas 6 – AP jest prekursorem antybiotyków beta
– laktamowych, w tym syntetycznej penicyliny. (np. zmodyfikowane penicyliny oporne na
działanie beta-laktamaz np. metycyklina, nafcylina, ampicylina)
KWAS 6-AP MO NA OTRZYMAĆ :
-
metoda bezpośrednich fermentacji (inkubacja w podło u naturalnym bez prekursora,
powstaje kwas 6 AP a nie odp. Penicylina)
enzymatyczna hydroliza penicyliny (substrat – acylaza – kwas 6 – AP) =
najwydajniejszy sposób
metody biochemiczne, mają szereg wad
ACYLAZA
Acylaza jest produkowana przez grzyby, promieniowce (ewentualnie inne bakterie),
wytwarzana przez tkanki roślinne i zwierzęce. Hydroliza w środowisku obojętnym i
zasadowym (7), w środowisku kwaśnym enzym jest zdolny do zwrotnej syntezy penicyliny.
Produkowane przez drobnoustroje acylazy dzielą się na dwa typy :
1. acylaza fenoksymetylopenicylowa (I typ)
Zwarta w grzybach i promieniowcach. Działa wydajniej ni acylaza benzylopenicylowa.
Mo e być enzymem konstutywnym lub indukowanym. Optimum działania w temperaturze 28
– 50 st, pH 8-10. Częściej wytwarzany zewnątrzkomórkowo
- Aspergillus
- Fusarium
- Mucor
- Penicillium
- Trihoderma
2. acylaza benzylopenicylowa (II typ)
Produkowana przez bakterie, głównie Gramm”-„, ma szerokie zastosowanie w przemyśle
farmaceutycznym. Optimum pH 7.5 – 8.5, temp 28 – 40 st. Enzym indukowany kwasem
fenoksyoctowym lub fenylooctowym (musi być w podło u produkcyjnych, jeśli chcemy
prowadzic syntezę na wysokim poziomie). W przemyśle stosowane szczepy metabolicznie
modyfikowane.
- E. Coli
- Aerobacter
- Micrococcus
- Pseudomonas
- Corynebacterium
- Kluyvera citrophila
- Pseudomonas mesangarum
- Bacillus megaterium
HODOWWLA BAKTERII Z TYPU I I(aby otrzymać kwas 6-AP)
- trzeba napowietrzać
Mikrobiologia przemysłowa ćw 9
-
alkaliczne pH
temp 24 – 30 st
maksimum wytwarzania enzymu przypada na fazę logarytmiczną wzrostu
bakterii
Jeśli będziemy pilnować powy szych warunków, otrzymamy acylazę w 0.1 - 1 % całej masy
komórkowej.
Teraz oczyszczanie: przez wytrącenie frakcji, chromatografię jonowymienną lub adsorpcyjną
elektroforezę, dializę lub ultrafiltrację.
Przed wykorzystaniem acylazy stosuje się immobilizację komórek producenta acylazy
(chcemy otrzymać czysty, wyizolowany enzym). Hydroliza – powstające ugrupowanie –
COOH powoduje obni enie pH, co mo e hamować aktywność enzymu. Dodaje się łuku
sodowego lub wody amoniakalnej by zniwelować ten efekt i zalkalizować środowisko.
Substratem są najczęściej sole potasowe / sodowe penicyliny beznylowej / fenoksymetylowej.
Wysoka wydajność – 95 – 100 %.
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)