To tylko jedna z 5 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
ZASZCZEPY MIKROBIOLOGICZNE
Charakterystyka wzrostu mikroorganizmów:
- bakterie - podział
- drożdże - paczkowanie
- grzyby - plecha
Pomiary ilości komórek:
- stężenie komórek
- stężenie masy komórek
Są to dwa zasadniczo różniące sie parametry np. zaraz po podziale komórki
bakteryjnej mam dwie komórki, ale są jeszcze małe i ich masą sie nie zmieniła, jest jak masą
jednej komórki. W praktyce mierzy sie zarówno masę i ilość komórek.
Pobieramy próbkę o znanej objętości, robi sie posiew i zlicza sie liczbę komórek lub
liczymy komórki pod mikroskopem
Obecnie można automatycznie zliczać liczbę komórek, jednak automat nie rozróżnia
komórek martwych i żywych
Pomiar przez posiew jest jednak długotrwały (24-48h), co jest problemem, gdy chcemy
na bieżąco kontrolować hodowle
Pomiar masy - mierzymy komórki żywe i martwe pozostałości komórek, ale są to pomiary
szybkie
Wprost - oddziela sie na sączkach mikroorganizmy (lub przez wirowanie) od płynu
pohodowlanego, próbkę suszymy i ważymy
Pomiar turbidometryczny - mierzymy rozpraszanie światła
Możemy robić również pomiary niebezpośrednie mierząc jakiś składnik np. wydzielany przez
komórki - CO2.
Trzeba wyznaczyć współczynnik opisujący zależność miedzy masą (ilością) komórek a
mierzonym składnikiem. Jednak ilość pewnych składników może zależeć od warunków
fizjologicznych, a masą sie nie zmienia.
Można mierzyć również: białka, ATP, kwasy nukleinowe.
!!! Problem jest z grzybami, gdyż one nie rosną w postaci pojedynczych komórek tylko w
koloniach, dlatego nie wiadomo, co mierzyć.
Dobry zaszczep mikrobiologiczny
1. Zawiera żywe i aktywne komórki
2. Jest dostępny w dużych ilościach
3. Wolny od zanieczyszczeń
4. Jego komórki musza mieć zachowana zdolność do wytwarzania interesującego nas
produktu
Dlaczego żywe i aktywne komórki?
Dążymy do tego, aby skracać do minimum fazę adaptacyjna hodowli. Podłoże do hodowli
inokulum różni sie od podłoża produkcyjnego. Podłoże takie ma taki skład, aby komórki
mnożyły sie jak najszybciej, natomiast podłoże produkcyjne ma taki skład, aby powstało jak
najwięcej pożądanego produktu
Czemu skracamy okres adaptacyjny:
Ekonomia - jest to czas, gdy nic sie nie produkuje
(…)
… musi być prosty i tani, aby pozwolić na
szybkie przesiewanie dużej ilości komórek.
Przykład:
- Poszukujemy enzymów proteolitycznych
- Posiewamy mikroorganizmy na podłoże zawierające białko, zazwyczaj kazeina, białko
mleka
- Na podłożu rośna sobie różne szczepy
- Po 48h wlewamy na płytkę kwas trójchlorooctowy, powoduje on wytracanie (koagulacje) białka
- W miejscach, gdzie kolonia nie rozkłada białka, otrzymujemy mętny „placek” wokół
kolonii, wokół tych, które rozkładają białko, pojawia sie rozjaśnienie
- Teraz już można łatwo wyizolować kolonie produkujące enzymy proteolityczne.
Gdy nie mamy testu przesiewowego, można brać pod uwagę grupę taksonomiczna. Izolujemy
dana grupe np. Streptomyces, gdy szukamy jakiegoś antybiotyku, i dopiero w tej grupie
szukamy konkretnego szczepu.
Po przesiewach nadal mamy…
… faza adaptacyjna, nie potrzeba
dodatkowej instalacji
- Skiełkowujemy spory w osobnej instalacji, dopiero potem zaszczepiamy w
reaktorze produkcyjnym
Gdy mamy grzyby niesporulujace:
- homogenizacja grzybni
- zaszczepiamy reaktor
Wzrost grzybów może mieć charakter rozproszony lub w agregatach.
Skąd możemy otrzymywać zaszczepy?
- Z komórek macierzystych, w większości krajów są przedmiotem opatentowanym…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)