To tylko jedna z 41 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Przechowywanie szczepów
Metody hodowli
Wykład 22
Przechowywanie szczepów
drobnoustrojów
Stosowana metoda przechowania szczepów powinna:
Zapewnić maksymalną przeżywalność komórek,
Zapewnić zachowanie cech biotechnologicznych szczepu,
Przeciwdziałać spontanicznym mutacjom i selekcjom
odmian mniej przydatnych w procesie technologicznym,
Ograniczyć przypadkowe zanieczyszczenia
mikrobiologiczne.
1
Metody przechowywania
szczepów drobnoustrojów
• Pasażowanie czystych kultur
• Zamrażanie kultur
• Suszenie czystych kultur
• Liofilizacja kultur
Metody przechowywania
szczepów – pasa owanie
Okresowe przeszczepianie
na świeże pożywki (częściej agarowe,
rzadziej płynne) i przechowywanie
w chłodni w temp.4oC. W zależności od drobnoustroju,
kultury przechowywane w tej formie mogą zachować
żywotność i aktywność biochemiczną od 2 tygodni
do kilku miesięcy (bakterie) i dłużej (promieniowce,
grzyby strzępkowe).
Szczepy drożdży i grzybów strzępkowych
przechowuje się ponadto na skosach agarowych
zalanych warstwą jałowej parafiny.
2
Metody przechowywania
szczepów – zamra anie
• Zamrażanie w niskich temperaturach
od -60oC do -80oC, w zamrażarkach
mechanicznych
• Zamrażanie w ciekłym azocie w temperaturach
od -156oC do -196oC
W biotechnologii, ten sposób przechowywania
jest podstawowym sposobem utrzymania przez
długi okres materiału biologicznego w stanie
pełnej aktywności. Materiał ten po rozmrożeniu
można wykorzystać do inokulacji hodowli.
Zamra anie kultur drobnoustrojów
Metoda ta polega na oddzieleniu drobnoustrojów od
podłoża wzrostowego (końcowy okres fazy wykładniczej
lub początkowy okres fazy stacjonarnej wzrostu) i
zawieszeniu ich w roztworze z dodatkiem czynnika
ochronnego.
Zawiesinę drobnoustrojów rozlewa się po 1 cm3 do
plastikowych ampułek z nakrętkami, fiolek, szklanych
kapilar, polipropylenowych słomek, które po zatopieniu
umieszcza się w zamrażarce lub w naczyniu z ciekłym
azotem.
Czynniki ochronne to: naturalne płyny o charakterze
białkowym, np. surowica krwi, bulion, odtłuszczone
mleko, roztwór żelatyny lub o charakterze
węglowodanowym, np. miód pszczeli, roztwory glukozy,
sacharozy, laktozy, dekstranu. Niekiedy stosuje się
roztwory aminokwasów (kw. asparaginowego,
glutaminianu sodu) albo też 10% roztwór glicerolu i 5%
roztwór dimetylosulfotlenku (DMSO).
3
Zamra anie kultur drobnoustrojów
c/ zawiesina komórek zawieszona w obecności czynników
ochronnych 5% glicerol lub 12% sacharoza) d/ napełnianie
sterylnych kawałków polipropylenowych słomek lub szklanych kapilar
h/ pojemnik napełniony kapilarami, i/ stelaż aluminiowy z pojemnikami
k/ zbiornik z ciekłym azotem
Zamrażanie kultur drożdży i grzybów strzępkowych
• Zamrażanie należy prowadzić tak,
aby zapewnić tworzenie się dużej ilości małych
kryształów wewnątrz komórki, gdyż duże
kryształy mogłyby doprowadzić do rozrywania
ścian komórkowych.
• Zazwyczaj proces zamrażania zawiesiny
drobnoustrojów prowadzi się tak, aby
temperatura obniżała się 1-2oC/min, dopóki nie
uzyska się temperatury ok.
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)