To tylko jedna z 2 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
METODY Z ZASTOSOWANIEM IMMUNOADSORBENTÓW
immunoadsorbentami są: kulki szklane, kulki plastikowe, cząstki agarozy, cząstki sepharozy, cząstki poliakrylamidu opłaszczone przeciwciałami skierowanymi przeciwko antygenom powierzchniowym danej populacji komórek (mogą też mieć postać polistyrenowych płytek Petriego opłaszczonych swoistymi przeciwciałami - jest to wtedy immunoadsorpcja w fazie stałej, czyli tzw. panning)
wykonanie: immunoadsorbenty umieszcza się w szklanej kolumnie i podczas inkubacji zawiesiny komórkowej z immunoadsorbentem następuje wiązanie się do opłaszczonych cząsteczek nośnika jedynie tych komórek, które reagują swoiście z danymi przeciwciałami; aby odzyskać komórki, przepłukuje się kolumnę (lub płytkę) dużą ilością odpowiedniego środowiska
zastosowanie: izolacja poszczególnych subpopulacji limfocytów
METODA IZOLACJI MAGNETYCZNEJ
jest to metoda z zastosowaniem paramagnetycznych cząstek polistyrenu (Dynabeads)
wykonanie: paramagnetyczne cząstki polistyrenu (o średnicy kilku mikrometrów) opłaszcza się przeciwciałami, a następnie miesza z zawiesiną komórek i inkubuje; w trakcie inkubacji następuje wiązanie między przeciwciałami opłaszczonymi na nośniku a komórkami mającymi na powierzchni odpowiedni antygen; komórki związane z cząsteczkami nośnika usuwa się („wyciąga się”) z zawiesiny za pomocą magnesu
inna metodą opartą na izolacji magnetycznej jest także metoda z wykorzystaniem zjawiska fagocytozy - do zwiesiny komórkowej dodaje się karbonylek żelaza i inkubuje; w trakcie inkubacji komórki fagocytujące „pożerają” drobiny karbonylku żelaza; po inkubacji z zawiesiny komórkowej usuwa się fagocyty z pochłoniętymi cząstkami żelaza oraz nadmiar karbonylku żelaza za pomocą silnego magnesu
METODA ROZETOWA E
zasada: oparta jest na zjawisku spontanicznego wiązania się erytrocytów barana z limfocytami T człowieka (dzięki obecnemu na powierzchni limfocytów T receptorowi dla krwinek czerwonych barana w postaci cząsteczki CD2)
wiązanie pomiędzy limfocytami T a erytrocytami barana jest bardzo trwałe, zwłaszcza jeśli erytrocyty zostaną wcześnie inkubowane z neuraminidazą
za rozetkę uważa się limfocyt T z przyłączonymi co najmniej 3 erytrocytami
utworzone rozetki można oddzielić od pozostałych komórek poprzez wirowanie na gradiencie Ficoll-Uropolina
Niezależnie od zastosowanej metody izolacji i od otrzymanej populacji komórkowej po zakończeniu procedury oczyszczania zawsze należy:
policzyć izolowane komórki i określić czystość otrzymanego preparatu (w rozmazie wybarwionym barwnikiem May-Grunwald Giemza)
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)