To tylko jedna z 3 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
TEMAT: Techniki immunologiczne ODCZYN WIĄZANIA DOPEŁNIACZA (OWD)
zasada: odczyn oparty jest na zjawisku hemolizy immunologicznej, tj. lizy erytrocytów spowodowanej przez związanie dopełniacza przez kompleks antygen na błonie erytrocytu (naturalnie występujący na powierzchni lub biernie opłaszczony) - przeciwciało (pod warunkiem, że przeciwciało jest klasy IgG lub IgM, aby miało zdolność wiązania dopełniacza). Reakcja taka jest dobrze widoczna makroskopowo, gdyż początkowo mętna zawiesina erytrocytów staje się klarowna, o intensywnym czerwonym kolorze.
zastosowanie: wykrywanie w badanym materiale zarówno obecności antygenów (o ile dysponujemy swoistymi przeciwciałami), jak i przeciwciał (o ile dysponujemy danym antygenem) w diagnostyce mikrobiologicznej wielu zakażeń bakteryjnych, grzybiczych i wirusowych
OWD można wykonać także jako test ilościowy - określenie miana antygenu lub przeciwciał w badanym materiale
Czynniki mające istotny wpływ na przebieg reakcji i ostateczny wynik:
temperatura reakcji
czas inkubacji
obecność elektrolitów
zastosowane stężenia reagentów
wielkość powstałego kompleksu.
przygotować: zinaktywowaną surowicę badaną - aby pozbyć się własnego dopełniacza
przeciwciała antyerytrocytarne (tzw. amboceptor) - z reguły surowica królika uodpornionego erytrocytami barana
erytrocyty barana opłaszczone przeciwciałami antyerytrocytarnymi w odpowiednim stężeniu
dopełniacz - źródłem jest najczęściej surowica świnki morskiej; ilość musi być ściśle określona tak, aby nie doprowadzić do fałszywie dodatnich lub ujemnych wyników
wykonanie: dwuetapowe
inkubacja badanej surowicy, w której poszukujemy przeciwciał, ze znanym antygenem lub badanej surowicy, w której poszukujemy antygenu, ze znaną surowicą odpornościową; następnie dodajemy do układu badanego dopełniacz (jeśli utworzy się kompleks immunologiczny, to zwiąże on dopełniacz, a jeśli nie, to dopełniacz pozostanie niezwiązany w roztworze
dodanie do układu badanego tzw. układu wskaźnikowego, czyli erytrocytów barana opłaszczonych przeciwciałami antyerytrocytarnymi
wynik:
dodatni (obecność w badanym materiale poszukiwanego składnika) - jeżeli w pierwszym etapie dopełniacz został związany przez kompleks immunologiczny, to w etapie drugim nie wystąpi hemoliza erytrocytów
ujemny (brak poszukiwanego składnika w badanym materiale) - jeżeli w pierwszym etapie dopełniacz nie został związany [bo nie powstał kompleks immunologiczny z powodu braku jednego z reagentów], to przyłączy się on do kompleksu erytrocyt-przeciwciało antyerytrocytarne w układzie wskaźnikowym i nastąpi hemoliza krwinek
(…)
…
dopełniacz + erytrocyty barana nie opłaszczone - brak hemolizy
wersja ilościowa: odczyn wykonuje się w szeregu probówek, do których dodaje się stałe objętości (stałe stężenia) każdego ze składników reakcji (reagentu znanego, tj. antygenu lub przeciwciała, dopełniacza, zawiesiny opłaszczonych erytrocytów barana), a badaną surowicę dodaje się w kolejnych rozcieńczeniach; wynik podaje się w postaci miana…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)