alfa lakto albumina; beta lakto globulina, albumina serum, kazeina Wiązanie peptydowe :dość krótkie, półtorakrotne; bliskość wiazania podwójnego C karbonyl=O umożliwia to powsatnie strultur rezonansowych =wiąz peptyd C-N ma częściowy charakt wiąz podwójnego= C-N jest krótsze niż standardowe C-N = grupa peptydowa zbud z atomów CO-NH- stosunkowo sztywna i płąska, możliwa jest rotacja wokół wiązań C alfa-N i C alfa-C, grupy peptydowe są ułożone pod różnym kątem. Metoda Melanii M. Bradford wykorzystuje fakt przesunięcia maksimum absorpcji roztworu barwnika Coomassie Brillant Blue (CBB) G-250 z 465 nm do 595 nm po związaniu z białkiem. Cząsteczka barwnika CBB oddziałuje poprzez grupy SO3ˉ z dodatnio naładowanymi resztami aminokwasowymi. Z barwnikiem reagują głównie reszty argininy, w mniejszym stopniu reszty histydyny, lizyny, tyrozyny, tryptofanu i fenyloalaniny. Błękit brylantowy Coomassie G-250 w środowisku kwaśnym ma brunatne zabarwienie, które po reakcji z białkiem zmienia się na błękitne. Natężenie barwy jest proporcjonalne do zawartości białka w roztworze. Białka naleŜą do podstawowych biopolimerów wchodzących w skład komórki. Zmiany stęŜenia białek kontrolują procesy metaboliczne komórki. Oznaczenie stężenia białka umożliwia również określenie wartości energetycznej spożywczych produktów białkowych. Odczynnik Bradford używany jest do określenia stężenia białka. Procedura oznaczenia stężenia białek wykorzystuje zjawisko tworzenia się kompleksu pomiędzy barwinkiem (Brilliant Blue G) a białkami. Kompleks białko-barwnik powoduje przesunięcie długości fali odpowiadającej maksimum absorpcji barwnika z 465 do 595 nm. Wartość absorbancji jest proporcjonalna do stężenia białka. Jako wzorzec białka stosuje się albuminę bydlęcą. Liniowa zależność absorbancji od stężenia lewy w zakresie stężenia białka 0,1- 1,4 mg/ml.
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)