Techniki immunologiczne - Test mikrolimfocytotoksyczny - wykład

TEST MIKROLIMFOCYTOTOKSYCZNY
jest to modyfikacja testu cytotoksycznego opracowana przez Terasaki i McClellenda
przygotowanie do testu: zawiesiny limfocytów pacjenta izolowanych z krwi obwodowej (w przypadku konieczności określenia antygenów zgodności tkankowej klasy II do badać należy uzyskać zawiesinę limfocytów B)
swoistych surowic odpornościowych skierowanych przeciwko antygenom HLA (gotowe surowice anty-HLA)
dopełniacza króliczego
wykonanie: wszystkie zagłębienia na płytkach Terasaki wypełnia się olejem parafinowym, a następnie do każdego zagłębienia pod parafinę wprowadza się surowicę anty-HLA o znanej swoistości oraz zawiesinę badanych limfocytów; po inkubacji płytek (37ºC, 30 minut) do każdego zagłębienia dodaje się dopełniacz i znowu inkubuje (37ºC, 60 minut); po tym czasie dodaje się barwnik (np. eozynę) i po kilku minutach formalinę; płytkę pozostawia się w temperaturze pokojowej na godzinę, po czym odczytuje się wynik
wynik: ocenia się w mikroskopie świetlnym wygląd komórek, obliczając odsetek komórek martwych (wybarwionych); ostateczny wynik podaje się wg umownej skali:
poniżej 25% komórek martwych w preparacie - wynik ujemny (dany antygen zgodności tkankowej nieobecny)
od 26 do 45% komórek martwych w preparacie - wynik wątpliwy
powyżej 46% komórek martwych w preparacie - wynik dodatni (dany antygen zgodności tkankowej obecny).
1
... zobacz całą notatkę