To tylko jedna z 24 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
1 08. Biochemia Podstawy biologii molekularnej Wiele bakterii zawiera plazmidy. Plazmidy są to małe, koliste cząsteczki DNA. Wprowadzenie plazmidu do bakterii nazywamy transformacją Klonowanie: włączanie fragementu DNA do wektora (plazmidu) Enzymy restrykcyjne rozpoznają charakterystyczne sekwencje DNA i rozcinają je Klonowanie: do plazmidu przeciętego enzymem restrykcyjnym wprowadzamy fragment DNA zawierający końce komplementarne do końców utworzonych przez ten enzym. 2 Klonowanie rekombinowanych plazmidów Wektory ekspresyjne pozwalają na ekspresję białka, którego DNA zostało wklonowane do plazmidu PCR (Polymerase Chain Reaction): Reakcja Łańcuchowa Polimerazy pozwala na uzyskanie fragementów DNA in vitro. Amplifikacja fragmentu DNA za pomocą polimerazy Taq. Polimeraza Taq jest odporna na wysokie temperatury, dlatego po kaŜdej reakcji próbka jest podgrzewana do 90oC. Następuje denaturacja powstałych dupleksów DNA, i po ochłodzeniu i ponownym związaniu starterów reakcja zaczyna się od nowa. Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) pozwala na otrzymanie (amplifikację) fragmentu DNA, z zastosowaniem duŜej cząsteczki DNA jako matrycy. Warunkiem jest zastosowanie odpowiednich starterów, czyli krótkich oligonukleotydów, które wiąŜą się do miejsc na początku i końcu sekwencji, która ma zostać zamplifikowana. Real-Time PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy czasu rzeczywistego) pozwala na ilościowe określenie stęŜenia badanego fragmentu DNA. Barwnik fluoryzujący daje sygnał tylko wtedy, gdy fragment DNA zostaje włączony do amplifikowanego DNA. 3 Real-Time PCR (Reakcja łańcuchowa polimerazy czasu rzeczywistego) Fluorescencja pojawia się w wyniku uwolnienia barwnika i jest odwrotnie proporcjonalna do ilości badanej sekwencji DNA. Plazmid Ti zmusza roślinę zakaŜoną Agrobacterium tumefaciens do produkcji auksyn (roslinnych czynników wzrostu) Produkcja roślin transgenicznych Plazmid Ti łącznie z plazmidem niosącym oporność na antybiotyk oraz obcy gen (np. odporność na gąsienice) zostaje włączony do komórki roślinnej. Rośliny zawierające plazmid są transgeniczne. Pomidor zawierający gen kodujący białko toksyczne dla owadów nie jest zjadany przez gąsienice. Soja odporna na Glyphosate ® po traktowaniu tym herbicydem Najczęściej uprawiane rośliny transgeniczne soja kukurydza bawełna 4 Rekombinowane retrowirusy moga wprowadzać obce geny do komórek zwierzęcych Transfekcja moŜe wprowadzić obce DNA do zarodka myszy. DNA wprowadzone do zarodka moŜe zintegrować się do genomu. Zarodek (zapłodnione jajo) jest następnie wprowadzany do samicy.
(…)
….
Śmierć po 4-5 dniach w wyniku niewydolności nerek i wątroby.
Amanityna blokuje przemieszczanie się polimerazy II RNA po DNA.
Elementy regulatorowe w bakteriach, droŜdŜach i u człowieka:
są coraz bardziej złoŜone.
Myszy, u których kolor
futra jest zakodowany
na chromosomie X,
wykazują plamy na futrze,
poniewaŜ kolor zaleŜy
od tego, który chromosom X
jest aktywny.
nowe
białko
transkrypcja
translacja
Chromosom X (determinuje płeć Ŝeńską) podlega inaktywacji
u róŜnych gatunków. U ssaków zawsze jeden z chromosomów
jest inaktywowany, a drugi aktywny, z tym, Ŝe mogą to być
róŜne chromosomy w róŜnych komórkach.
Mechanizm inaktywacji
chromosomu X:
RNA „Xist”,kodowane
przez chromosom X,
opłaszcza jeden
z chromosomów
i powoduje jego
inaktywację.
14
Gen SRY, obecny na chromosomie Y,
odpowiada za kształtowanie…
… kodują grupę krwi A i B,
są genami kodominującymi
i koduje grupę O,
jest genem recesywnym
matka
ojciec
dzieci
ojciec
dzieci
kodominacja: sytuacja,
gdy w układzie
heterozygotycznym dochodzi
do pełnej ekspresji dwóch alleli
tego samego genu.
Przykład: grupa AB.
Wiele cech dziedziczy się zgodnie z prawami Mendla:
kto jest mamą Wandy?
Cecha recesywna oznacza brak białka, odpowiedzialnego
za powstanie danej cechy. Przykład: niebieski kolor oczu
jest spowodowany brakiem barwnika. Grupa krwi „O”
jest wynikiem braku enzymów kodujących grupy A i B.
W obu przypadkach białka kodujące enzymy są defektywne.
PoniewaŜ kaŜdy ma dwie pary genów, kodujące daną cechę,
to w przypadku cechy recesywnej, oba geny muszą kodować
defektywne białka.
Przykłady dominujących genów u człowieka: brązowy kolor
oczu, kręcone włosy…
…
na matrycy mRNA.
Jedna nić DNA jest transkrybowana (przepisywana) w RNA
Jednostka transkrypcyjna: odcinek między promotorem i terminatorem
nić kodująca
nić matrycowa
Synteza RNA wymaga
rozplecenie DNA
i powstania
„transkrypcyjnej bańki”
W czasie transkrypcji, polimeraza RNA rozplata i splata DNA,
jednocześnie syntezując RNA
nić kodująca
nić matrycowa
11
Eukariotyczne mRNA jest modyfikowane na obu końcach:
czapeczka („cap”) na 5’-końcu i poliadenylacja na 3’-końcu
„Cap” (czapeczka) blokuje 5’-koniec mRNA
i moŜe być metylowany w kilku pozycjach
7-metyloguanozyna
związana z 5’-końcem
przez wiązanie
5’,5’-trifosforanowe
5’
5’
większość eukariotów z wyjątkiem jednokomórkowych
10-15% mRNA
5’----5’
Struktura czapeczki: GpppApNp
Transkrypcja ma 4 etapy
Transkrypcja = synteza RNA na matrycy DNA przez polimerazę RNA…
… jest wiele (ok. 400 u droŜdŜy).
Profaza I: 3 homologiczna pary chromosomow tworzą tetrady.
Cross over ma miesce w obrębie chiasmata.
Komórki eukariotyczne zawierają kilka polimeraz DNA.
Terminacja replikacji liniowych chromosomów
eukariotycznych jest powiązana z telomerami
(strukturami na końcach chromosomów).
Homologiczne pary migrują w stronę przeciwnych
biegunów dzielącej się komórki
Pierwszy podział…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)