Oznaczanie aktywności dehydrogenazy mleczanowej - omówienie

Oznaczanie aktywności dehydrogenazy mleczanowej
Do klasy oksyreduktaz należą enzymy katalizujące reakcje utleniania i redukcji.
Dehydrogenaza mleczanowa LDH katalizuje odwracalną reakcję redukcji pirogronianu do mleczanu, podczas której NADH utlenia się do NAD+:
CH3-CHO-COO- + NADH + H+ CH3-CHOH-COO- + NAD+
Proces można śledzić spektrofotometrycznie, bo forma zredukowana NADH posiada dodatkowe pasmo absorpcji przy 340 nm.
Stąd szybkość reakcji tworzenia NAD+ i mleczanu śledzi się mierząc zanik pasma absorpcji przy 340 nm metodą Wróblewskiego.
Aktywność dehydrogenazy podaje się w jednostkach Wróblewskiego.
Jednostka Wróblewskiego- taka aktywność enzymu w 1 cm3 surowicy, która:
W temp 25stC
Objętości 3 cm3 Przy 340 nm
l = 1 cm
daje w czasie 1 min zmianę absorbancji NADH o 0,001.
W praktyce przez porównanie aktywności standardowej LDH z aktywnością uwolnionej do osocza dehydrogenazy mleczanowej można określić przeżywalność komórek.
... zobacz całą notatkę