Oczyszczanie białek metodą sączenia molekularnego

Nasza ocena:

5
Pobrań: 994
Wyświetleń: 5257
Komentarze: 0
Notatek.pl

Pobierz ten dokument za darmo

Podgląd dokumentu
Oczyszczanie białek metodą sączenia molekularnego - strona 1 Oczyszczanie białek metodą sączenia molekularnego - strona 2 Oczyszczanie białek metodą sączenia molekularnego - strona 3

Fragment notatki:


Biochemia – sprawozdanie 4    Oczyszczanie białek metodą sączenia molekularnego     Opis doświadczenia    Przez kolumnę chromatograficzną, napełnioną roztworem NaCl,  przepuszczamy zawiesinę żelu Sephadex G75, następnie otwieramy wylot i  przepłukujemy roztworem NaCl i po wyrównaniu poziomu cieczy z górną powierzchnią  słupa żelu zamykamy wylot  Pipetą nanosimy na powierzchnię złoża żelu 300 µl mieszaninę Blue Dextranu  heksocyjanażelazianu (III) potasu i albuminy z osocza bydlęcego (BSA)  Otwieramy wylot kolumny i zbieramy do ponumerowanych probówek wyciek  z kolumny (po 1 ml)  W momencie wsiąknięcia barwnego roztworu w żel, przy pomocy pipety  Pasteura dolewamy 0.9% roztwór NaCl i prowadzimy dalej chromatografię, uzupełniając  poziom roztworu nad żelem, aż do całkowitego wymycia roztworu heksacyjanożelazianu  (III) potasowego      Przerywamy elucję, wylewamy żel do zlewki i mierzymy objętość jaką  zajmował żel, napełniając kolumnę wodą i mierząc objętość wody. Notujemy jako  wartość Vtot.   Do wszystkich zebranych frakcji dodajemy po 2 ml eluentu i mierzymy  absorbancję przy długości fali 620 nm (Blue Dextran) i 280 nm (albumina). Notujemy  wyniki.  Na papierze milimetrowym robimy diagram elucji. Obliczamy dla BSA  wartość współczynnika podziału pomiędzy fazą ciekłą a żelową KAV         Obserwacje Numer frakcji Absorbancja 280 nm 620 nm 1 0 0 2 0,013 0,010 3 0,016 0,010 4 0,014 0,010 5 0,014 0,010 6 0,019 0,011 7 0,016 0,011 8 0,014 0,009 9 0,016 0,010 10 0,096 0,031 11 0,127 0,036 12 0,039 0,015 13 0,027 0,010 14 0,092 0,010 15 0,344 0,009 16 0,408 0,050 17 1,555 0,000 18 0,622 0,000 19 0,996 0,000 20 0,533 0,000   Obserwacje Uzyskano 14 probówek zawierających po 1 cm3.  Barwę niebieską reprezentował roztwór  zawierający Blue Dextran, natomiast zielonkawo-żółtą roztwór z heksocyjanażelazianu (III)  potasu.    Obliczenia KAV = Ve – V0/ Vtot – V0 Ve – objętość elucyjna BSA V0 – objętość pusta kolumny (objętość elucyjna Blue Dextranu) Vtot – objętość całkowita złoża Ve = 17 cm3 V0 = 16 cm3  Vtot = 17 cm3  KAV = 17-16/17-17 = 0   Wnioski Wykres ukazuje, że zależność absorbancji od objętości dla fali długości 280 nm  wyniosła 17 cm3, a dla długości 620 nm 16 cm3.  Wynik KAV równy 0 wskazuje na to,  że rozdział mieszanin nie nastąpił. Udało się oddzielić jedynie  heksacyjanożelazianu(III) potas, ponieważ jego cząsteczki zatrzymywały się w  ... zobacz całą notatkę



Komentarze użytkowników (0)

Zaloguj się, aby dodać komentarz