To tylko jedna z 61 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Amplifikacja DNA metodą PCR Amplifikacja DNA metodą PCR (łacuchowej reakcji polimerazy) (łacuchowej reakcji polimerazy – reakcja ta odzwierciedla naturalny proces replikacji i umożliwia w warunkach in vitro szybkie powielenie wybranych odcinków DNA lub RNA. Badana sekwencja DNA identyfikowanego mikroorganizmu jest powielana przy użyciu syntetycznych oligonukleotydowych starterów (primerów), z których każdy jest komplementarny do jednego końca sekwencji docelowej DNA. Startery te są wydłużane w kierunku przeciwnym, za pomocą termostabilnej polimerazy DNA, w cyklu który obejmuje trzy podstawowe etapy: 1. denaturacja dwuniciowej matrycy w temp. 90-95°C 2. wiązanie starterów do jednoniciowej matrycy (50-65°C) 3. synteza nici komplementarnej (68-72°C) Łańcuchowa reakcja polimerazy -PCR Umożliwia uzyskanie dużej liczby kopii danej sekwencji DNA Konieczna jest znajomość sekwencji krótkich odcinków DNA po każdej stronie sekwencji przeznaczonej do powielenia startery Etapy cyklu reakcji PCR: denaturacja, hybrydyzacja i elongacja Liczba cykli jest uzależniona od wymaganej krotności powielenia wyjściowego DNA Schemat PCR Ocena wyników PCR na żelu agarozowym W reakcji PCR powielane są krótkie odcinki DNA Po jej zakończeniu należy sprawdzić czy powstał produkt o przewidywanej długości Do oceny wyników stosuje się elektroforezę na żelu agarozowym DNA jest ujemnie naładowane i wędruje w żelu od ujemnej do dodatniej elektrody Szybkość przemieszczania się DNA zależy od długości powielonych odcinków Żel agarozowy zawiera substancję, która wbudowuje się w DNA i fluoryzuje w świetle UV Cząsteczki DNA widoczne są jako świecące prążki M Aparat do elektroforezy Zdjęcie żelu agarozowego po rozdziale elektroforetycznym 1 2 3 Analiza za pomocą reakcji PCR 1. Izolacja materiału, np. DNA z krwi 3. Reakcja PCR w termocyklerze z określoną ilością cykli 4. Rozdział produktu reakcji PCR na żelu agarozowym i wizualizacja w świetle UV 2. Sporządzenie mieszaniny reakcyjnej, np. MasterMix+ startery specyficzne dla fragmentu szukanego genu +DNA badane Termocykler Wynik rozdziału elektroforetycznego produktu PCR Profil restrykcyjny DNA Profil restrykcyjny DNA (RFLP/DNA – r (RFLP/DNA – estriction estrictio f ragment ragmen l enght enght p olymorphism olymorphis ) –
(…)
….
Przemysłowe zastosowanie grzybów
strzępkowych
Produkcja antybiotyków
• penicylina (Penicillium notatum, Penicillium chrysogenum)
• cyklosporyna A (Trichoderma polysporum)
Produkcja enzymów
• α-amylaza, glukoamylaza, pektynaza, celulazy, proteazy,
lipazy, katalaza (Aspergillus, Penicillium, Mucor, Rhizopus,
Trichoderma)
Produkcja kwasów organicznych
• kwas cytrynowy (Aspergillus niger)
• kwas itakonowy…
… bezpłciowego jak
i płciowego.
KLASYFIKACJA GRZYBÓW STRZĘPKOWYCH
Grzyby pleśniowe należą do
3 klas:
Zygomycetes
(Sprzężniaki)
Ascomycetes
(Workowce)
Deuteromycetes
(Grzyby niedoskonałe)
Klasyfikacja grzybów strzępkowych
Sprzężniaki
Workowce
Grzyby
niedoskonałe
cechy morfologiczne grzybni wegetatywnej
strzępki komórczakowe, wielokomórkowe
Klasyfikacja grzybów strzępkowych
Grzyby
niedoskonałe
Sprzężniaki…
…
- występują na
owocach, chlebie
i innych produktach
Workowce
tworzą grzybnię wielokomórkową składającą się z
rozgałęzionych strzępków rozrastających się w
różnych kierunkach i tworzących kolonie o różnym
zabarwieniu.
Rozmnażają się bezpłciowo i płciowo.
Emericella (teleomorfa)
Aspergillus (anamorfa)
– występuje często w produktach
spożywczych tworząc nalot, który po
pewnym czasie przybiera kolor czarny…
… na rozmiar
• grzyby mikroskopowe
• grzyby makroskopowe
tradycyjny
• drożdże (jednokomórkowe)
• grzyby strzępkowe (nitkowate, mycelialne, pleśniowe)
Podział ten jest nieprecyzyjny - ten sam gatunek, zależnie od
warunków, może rosnąć w postaci pojedynczych komórek lub
rozgałęzionej grzybni
• drożdżaki – wytwarzają strzępki, mogą rozmnażać się tylko
wegetatywnie
Grzyby pleśniowe
• organizmy tlenowe…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)