To tylko jedna z 6 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
18.03.2013R. METODY OZNACZANIA SKŁADNIKÓW ŻYWNOŚCI: BIAŁEK, SACHARYDÓW ORAZ TŁUSZCZÓW Metody oznaczania białek. Właściwości białek wykorzystywane w metodach oznaczania: • Prawie stała zawartość azotu w białkach tego samego rodzaju. • Zdolność do absorpcji promieniowania o określonej długości fali przez niektóre aminokwasy obecne w białkach. • Zdolność tworzenia barwnych kompleksów z niektórymi substancjami lub jonami. • Właściwości immunochemiczne. Podział metod oznaczania białek. BEZPOŚREDNIE POŚREDNIE Spektrofotometrycznie Nefelometrycznie refraktometrycznie Określenie zawartości azotu, a następnie przeliczenie go na białko przy użyciu odpowiednich współczynników przeliczeniowych. Np. met Kjeldahla METODA KJELDAHLA 1. mineralizacja próbki 2. destylacja amoniaku z parą wodną 3. miareczkowanie Obok azotu zawrtego w białkach, oznaczany jest N pochodzący z innych związków (z jonów amonowych, gr. Amidowych, aminowych oraz iminowych). Nie oznaczany jest azot pochodzący z azotanów(III), azotanów(V) oraz azot aromatycznych pierścieni heterocyklicznych. Do oznaczania należy pobrać taką próbę, aby zawierała od 0,02 g azotu (z reguły ok. 0,5-1,5 g produktu). TABELA. Średnia zawartość azotu i mnożniki do przeliczania azotu na białko. Mineralizacja- utlenianie zw.organicznych do di tlenku węgla, wody, amoniaku. N białko-C-NH2 + x H2SO4 x CO2 + y (NH4)2SO4 + z SO2 2NH3 + H2SO4 → (NH4)2SO4 Rozkład siarczanu(VI) amonu po zalikalizowaniu roztworem NaOH. (NH4)2SO4 + 2 NaOH → 2 NH3 + Na2SO4 + 2 H2O Warunki: Stężony H2SO4, katalizatory CuSO4, HgSO4; mieszanina selenowo-miedziowa. TABELA. Współczynniki przeliczeniowe azotu na białko oraz ilość odczynników stosowanych podczas mineralizacji niektórych produktów żywnościowych. produkt Masa naważki Obj. H2SO4 M. Katalizat. Współczynnik przeliczeniowy Destylacja amoniaku z parą wodną NH3 + H3BO3 → NH4H2BO3 W odbieralniku wydzielony amoniak wiąże się ze słabym kwasem, np. kwasem borowym występującym w nadmiarze. Miareczkowanie. NH4H2BO3 + HCl → NH4Cl + H3BO3 LUB 2 NH4H2BO3 + H2SO4 → (NH4)2SO4 + 2 H3BO3 Ilość azotu w próbce obserwuje się w ilości ml kwasu zużytego do miareczkowania. 1 cm3 H2SO4 (o stężeniu 0,1 mol/dm3)= 0,0028g N 1 cm3 HCl ( - II - ) = 0,0014g N Met. Kjeldahla- automatyczne urządzenia służące do oznaczeń. METODY OPARTE NA WBUDOWANIU BARWNIKA. Czerń amidowa 10B Oranż G Błękit Coomassie G-250 Białko i barwnik reagują ilościowo tworząc nierozpuszczalne kompleksy.
(…)
… grup aminowych i odmiareczkowaniu wolnych
grup karboksylowych występujących w białku ( kwas asparaginowy i glutaminowy ) roztworem
wodorotlenku sodu.
Przykładowa procedura postępowania przy oznaczaniu kazeiny w mleku metodą formolową: Do zlewki pobrać 10 cm3
mleka, dodać 0,5 cm3 fenoloftaleiny i miareczkować 0,1 mol/dm3 roztworem NaOH do uzyskania lekko różowego
zabarwienia. Następnie dodać 2 cm3 20% roztworu formaliny i miareczkować ponownie 0,1 mol/dm3 roztworem NaOH
do momentu uzyskania lekko różowego zabarwienia, utrzymującego się przez 30 sekund.
Procentową zawartość kazeiny w mleku oblicza się wg wzoru:
X = a · 1,92
a - oznacza objętość 0,1 mol/dm3 roztworu NaOH zużytego do miareczkowania po dodaniu
formaliny, w cm3.
METODY SPEKTROFOTOMETRYCZNE
BIURETOWA – wykorzystuje reakcję zachodzącą…
… antronowa, m.rezorcynowa, m. heksacyjanożelazianowa;
metody chromatograficzne: chromatografia cienkowarstwowa lub bibułowa, kolumnowa, gazowa,
wysokosprawna chromatografia cieczowa;
metody enzymatyczne.
Metody fizyczne
Mogą być stosowane jedynie do oznaczania sacharydów rozpuszczalnych w wodzie.
Metody densymetryczne – polegają na pomiarze gęstości wodnych roztworów sacharydów za
pomocą areometru…
… alkalicznym (pH ok. 12) i w temp. wrzenia
roztworu. Schemat reakcji podany jest poniżej:
Metoda Luffa – Schoorla – redukcja jonów Cu2+ zawartych w płynie Luffa przez sacharydy
redukujące.
Środowisko zasadowe (pH ok 9), temp wrzenia.
W skład płynu Luffa wchodzi węglan sodu, kwas cytrynowy zamiast winianu sodu i potasu
…
… spożywczych mają
metody oparte na redukcji soli miedzi(II) w środowisku alkalicznym. Odczynniki miedziowe
stosowane w metodach miareczkowych to zasadowe roztwory siarczanu(VI) miedzi(II), zawierające
winian sodu i potasu lub cytrynian sodu, glicerynę lub inny związek tworzący rozpuszczalny
kompleks z jonami miedzi:
Metoda Fehlinga - odczynnik Fehlinga I (CuSO4 · 5 H2O) i Fehlinga II (winian sodu i potasu…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)