To tylko jedna z 2 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Izolacja plazmidowego DNA na małą skalę (MINI-PREP) Przebieg ćwiczenia 1. Z hodowli E. coli prowadzonej przez noc pobraliśmy 2 ml i zwirowaliśmy 1 minutę 6000 obr/min 2. Zlaliśmy pipetą supernatant, do osadu komórek dodaliśmy 100ul buforu GTE (50mM glukoza, 25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 10 mM EDTA) i dokładnie zworteksowaliśmy. Dodać roztworu RNA-zy A do końcowego stężenia 100ug/ml 3. Dodaliśmy 200ul buforu do lizy i wymieszaliśmy przez odwracanie probówki. Pozostawiliśmy w temperaturze pokojowej na dokładnie 5 minut. 4. Dodaliśmy 150ul 3M octanu sodu (pH=4,8), wymieszaliśmy dokładnie przez odwracanie probówek. Umieściliśmy na lodzie na 10 min. 5. Wirowaliśmy próbki 10 min 13 000 obr/min. 6. Przenieśliśmy supernatant do świeżej probówki (probówki z pozostałym osadem wyrzucić), oszacować objętość. Dodaliśmy 2 objętości izopropanolu, wymieszaliśmy delikatnie przez odwracanie probówki i pozostawiliśmy w temp. pokojowej na 10-15 minut. 7. Wirowaliśmy próbki 15 min. 13 000 obr/min. 8. Ostrożnie zlaliśmy supernatant, dodaliśmy do osadu 300ul 70% etanolu, wymieszaliśmy przez odwracanie probówki. 9. Wirowaliśmy próbki 5 min 13 000 obr/min. 10. Usunęliśmy supernatant, do osadu dodaliśmy 300ul 96% etanolu, wymieszaliśmy przez odwracanie probówki. 11. Wirowaliśmy próbki 5 min 13 000 obr/min. 12. Usunęliśmy dokładnie cały etanol, odwróciliśmy probówki do góry dnem i pozostawiliśmu otwarte na czystym ręczniku papierowym na ok. 5-10 min. 13. Rozpuściliśmy osad DNA w 30ul buforu TE. Wynik: Z hodowli E. coli które uległy transformacji wyizolowaliśmy osad DNA, który rozpuściliśmy w 30 µl buforu TE. Następnie wykorzystaliśmy go do analizy restrykcyjnej i PCR.
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)