Izolacja czystych kultur- laboratorium 4

Nasza ocena:

5
Pobrań: 147
Wyświetleń: 2086
Komentarze: 0
Notatek.pl

Pobierz ten dokument za darmo

Podgląd dokumentu
Izolacja czystych kultur- laboratorium 4 - strona 1 Izolacja czystych kultur- laboratorium 4 - strona 2 Izolacja czystych kultur- laboratorium 4 - strona 3

Fragment notatki:

Laboratorium 4. Izolacja czystych kultur
Escherichia Coli - pojedyncze kolonie są lekko wypukłe na środku i ciemniejsze, mają gładkie brzegi, barwa kremowa/ecru, kolonie błyszczące; (37°C).
Serratia marcescens (pałeczka cudowna / pałeczka krwawa) - wytwarza czerwony barwnik (prodigiozyna) pod wpływem rozproszonego światła (17-19°C, optimum 28°C), pojedyncza kolonia wygląda jak kropla krwi, rozwija się na prawdziwym, suszonym mięsie, suszonych szynkach, wędzonych, suszonych rybach (ale tylko na tradycyjnych, nie sklepowych); cuda typu „Matka Boska płacze krwawymi łzami” - bakterie te mają idealne warunki do życia w kaplicach, kościołach (temperatura + rozproszone światło) i dlatego potrafią się tam świetnie rozwinąć;
Rozizolowanie bakterii: 1. posiew redukcyjny hodowli mieszanej E. Coli i S. Marcescens (1 płytka) 2. metoda szeregu rozcieńczeń (2 płytki, 6 sterylnych probówek) 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 Do 6 sterylnych probówek wlewa się sterylnie podane ilości płynu fizjologicznego. Do 1 probówki wlać 1 ml bakterii z hodowli wyjściowej. Otrzymujemy tam 10krotne rozcieńczenie (zapis: 10-1). Bardzo starannie wymieszać. Do 2 probówki pobrać 1 ml bakterii z probówki 1. Otrzymujemy w stosunku do hodowli wyjściowej rozcieńczenie 100krotne. Wymieszać. Do probówki 3 pobrać 0,1 ml (100μl) z probówki 2. Otrzymujemy rozcieńczenie 10000 krotne. Wymieszać. Do 4 1ml z 3. Do 5 1ml z 4. Do 6 1ml z 5. Z dwóch ostatnich probówek pobieramy po 100 μl bakterii i wykonujemy posiew głaszczką szklaną. Na płytce należy zapisać rozcieńczenie.
Płyn fizjologiczny - 0,9% roztwór NaCl - roztwór izotoniczny w stosunku do bakterii - nie mogą w nim się rozmnażać, ale przeżyją kilka godzin; płyn Ringera - prawie to samo; 0,86% roztwór NaCl;
W metodzie szeregu rozcieńczeń pierwsze rozcieńczenie musi być 10 krotne. Kolejne już wybieramy dowolnie (10krotne, 100krotne, mieszane).
Laboratorium 5. Metody liczenia drobnoustrojów
Wyniki poprzedniego doświadczenia: Z płytki, na którą posiana została hodowla rozcieńczona do 10-6, wyrosło 120 kolonii E.Coli, więc w 100μl było 120 komórek bakterii. 120x10=1200 - liczba bakterii w 1 ml. 120x10x106~=1,2x109 komórek w 1 ml hodowli wyjściowej! wynik zawsze podaje się w sztukach/ml! (bądź gram zamiast mililitra)
Płytka, na którą została posiana hodowla rozcieńczona do 10-7: 12x10x107=1,2x109 kom/ml Średnia arytmetyczna nie liczy się, gdy jest więcej niż 300 kolonii na płytce
E. Coli - duże kolonie S. Marcescens - małe, drobne kolonie
10-7: E.Coli: 4 S. Marcescens: 11 10-6: E.Coli: 30-40
Ćwiczenie: Zrobić szereg rozcieńczeń: 10-1 10-3 10-5 10-6

(…)

… z ćwiczenia 1 płyn fizj. Po wykonaniu należy odczytać gęstość optyczną dla tych rozcieńczeń + dla hodowli wyjściowej (nierozcieńczanej). Używamy długości światła 550 nm. 3. Obejrzeć komorę Thoma pod mikroskopem - znaleźć duże i małe kwadraty, a następnie spróbować policzyć Saccharomyces Cerevisiae. Należy ustawić ostrość na sucho na mikroskopie- żeby zobaczyć te kwadraty. Obiektyw imersyjny - nie da się nim oglądać tego, co jest „w powietrzu” czyli bakterii, trzeba nalać do niego specjalnego oleju. Mikroskop - od najmniejszego do największego zbliżenia, śruba makro tylko raz, żeby znaleźć, potem mikro dla znalezienia ostrości i przy przestawianiu przybliżeń na kolejne.
Potem dać kroplę Saccharomyces cerevisiae (drożdże piekarskie) - nieruchliwe, spokojne, tak jak erytrocyty czy leukocyty i spróbować…
… można oszacować ich ilość. Inne metody: - liczenie komórek bakterii na filtrach membranowych (gł. wodne środowiska ubogie w drobnoustroje); - oznaczanie suchej masy drobnoustrojów (promieniowce i grzyby nitkowate); - biluminescencja i chemiluminescencja - miarą biomasy jest stężenie ATP; - radiometria - dostarczanie mikroorganizmom substratu znakowanego izotopem promieniotwórczym, poziom radioaktywności…
… bakterii z danym związkiem jest ich mniej niż w kontrolnej, tzn. że ten związek je zabija; Gęstość Optyczna (O.D.) - pot. „zmierz absorbancję bakterii” 550/560 nm - takiej długości światła używa się najczęściej, ale może być też 580 czy nawet 600nm, byle cały czas była używana jedna i ta sama długość;
Krzywa standardowa krzywa zależności wartości O.D. 550 od liczby bakterii; z ćw. 1 oszacujemy ilość…
... zobacz całą notatkę

Komentarze użytkowników (0)

Zaloguj się, aby dodać komentarz