To tylko jedna z 38 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Analiza ilościowa
mikroorganizmów
Wykład 13
Wykonanie analizy pod pod kątem
określenia liczby drobnoustrojów?
Ocena próbek ró nych materiałów (wody,
farmaceutyków, opakowań, produktów
spo ywczych, itp.) pod kątem stopnia
zanieczyszczenia mikrobiologicznego lub
wielkości populacji drobnoustrojów (gleba).
- określanie ogólnej liczby drobnoustrojów,
- określanie liczby drobnoustrojów nale ących
do danych grup.
Określenie szybkości namna ania określonego
drobnoustroju hodowanego pod kątem
otrzymania określonego metabolitu – proces
biotechnologiczny.
1
Klasyczne metody określania
ilości (liczby) drobnoustrojów
Metody bezpośrednie – metody
mikroskopowe
Metody pośrednie:
- hodowlane,
- wagowe,
- optyczne
Metody mikroskopowe
Bezpośrednie liczenie komórek
mikroorganizmów pod mikroskopem
Liczenie drobnoustrojów przy użyciu komór
(np. hemocytometru, komory Thoma, komory
Bürkera).
Liczenie drobnoustrojów w preparacie
przyżyciowym.
Liczenie drobnoustrojów metodą Breeda
w preparacie barwionym.
Metoda DEFT (Direct Epifluorescent Filter
Technique) – bezpośrednia epifluorescencyjna
technika filtracyjna.
2
Liczenie drobnoustrojów
w komorze Thoma
Komora Thoma – szklana komora o głębokości
0,1 mm, na dnie której zostało zaznaczonych 16
dużych kwadratów, podzielonych następnie na 16
małych kwadracików o powierzchni 0,0025 mm2.
Objętość kwadracika wynosi 0,00025 mm3.
Liczy się drobnoustroje w 40 małych kwadracikach.
Liczbę drobnoustrojów „L” w 1 cm3 oblicza się ze
wzoru:
L=a
x
n
x
4000 x 1000
a – średnia liczba mikroorganizmów w 1 małym
kwadraciku
n – rozcieńczenie próbki
Komora Thoma do liczenia
drobnoustrojów
3
Liczenie drobnoustrojów
w hemocytometrze
i w komorze Bürkera
Liczenie odbywa się w podobny sposób
jak w komorze Thoma, jednakże
objętość kwadracików w komorze
Bürkera i hemocytometrze wynosi
0,004 mm3, co uwzględnia się w
poniższym wzorze .
Liczba drobnoustrojów w 1 cm3
L = a x n x 250 x 1000
W hemocytometrze, komorze
Thoma, komorze Bürkera liczy
się dro d e, zarodniki grzybów.
Nie liczy się komórek bakterii.
4
Liczenie drobnoustrojów
w preparacie przy yciowym
Metoda polega na wykonaniu preparatu
bezpośredniego.
1 kroplę zawiesiny bakteryjnej (o znanej objętości)
nanosi się na powierzchnię szkiełka
podstawowego i przykrywa szkiełkiem
nakrywkowym.
Liczy się pod mikroskopem średnią liczbę
komórek (2-50 komórek w polu widzenia). Liczenie
należy przeprowadzić w 3 preparatach, licząc co
najmniej po 20 pól widzenia w każdym preparacie.
Należy policzyć przynajmniej 1000 komórek
Liczenie drobnoustrojów
w preparacie przy yciowym
Liczbę drobnoustrojów „L” w 1 cm3
oblicza się ze wzoru:
1000
L=
x
n
x
a
Πr2 x h
a - średnia liczba komórek w polu widzenia
n – rozcieńczenie zawiesiny drobnoustrojów
r – promień pola widzenia [mm]
h – grubość warstwy cieczy między szkiełkami [mm]
5
Liczenie drobnoustrojów metodą
Breeda w preparacie barwionym
Etapy:
Na szkiełku podstawowym, na znanej
powierzchni (100 mm2) wykonuje się
równomierny rozmaz
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)