HPLC to wysokosprawna (wysokociśnieniowa) chromatografia cieczowa, w której faza ruchoma jest tłoczona do kolumny pod zwiększonym ciśnieniem.
Elementy:
Zbiornik fazy ruchomej
Filtr
Pompa
Manometr
Dozownik (umożliwia wprowadzenie próbki pod ciśnieniem atmosferycznym do kolumny, w której panuje wysokie ciśnienie (kilkadziesiąt MPa))
Kolumna z termostatem (zwykle stalowe, pakuje się je sorbentami „na mokro” (techniką zawiesinową) lub kupuje się gotowe; mikrokolumny o bardzo małej średnicy - pojawiają się trudności z jednolitym upakowaniem; przedkolumna - dodatkowa krótka kolumienka do zatrzymywania zanieczyszczeń)
Detektor: wzmacniacz i kolektor frakcji (konieczny element, reaguje na składniki rozdzielone, może nim być polarymetr)
Rodzaje detektorów:
Spektrofotometryczne (mierzą absorbancję w UV i Vis)
UV 254nm (bo większość ją absorbuje)
W zakresie 190-600nm z płynnym nastawieniem długości fali
Z matrycą diod (DAD): część promieniowania niezaabsorbowana przez próbkę jest rozszczepiana i pada na matrycę diod, z których każda rejestruje wąskie spektrum światła; widmo można otrzymać w 3D
Spektrofluometryczne: czujne na związki wykazujące fluorescencję
Refraktometryczne: pomiar różnicy współczynników załamania czystej fazy ruchomej i fazy ruchomej z substancjami rodzielonymi
Elektrochemiczne: wykrywają substancje ulegające reakcjom utleniania i redukcji
Faza ruchoma w HPLC powinna:
Odpowiednio rozpuszczać próbę
Umożliwiać detekcję próbki
Być bardzo czysta
Nie reagować z fazą stacjonarną, ani z próbką
Nie rozkładać się w trakcie analizy
Być tania
(…)
…
HPLC to wysokosprawna (wysokociśnieniowa) chromatografia cieczowa, w której faza ruchoma jest tłoczona do kolumny pod zwiększonym ciśnieniem.
Elementy:
Zbiornik fazy ruchomej
Filtr
Pompa
Manometr
Dozownik (umożliwia wprowadzenie próbki pod ciśnieniem atmosferycznym do kolumny, w której panuje wysokie ciśnienie (kilkadziesiąt MPa))
Kolumna z termostatem (zwykle stalowe, pakuje się je sorbentami…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)