To tylko jedna z 2 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Mutacje punktowe:
Ponieważ istnieją liczne trudności w pracy z mutacjami o charakterze letalnym, częściej stosuje się prostsze mutacje tzw mutacje punktowe, które zmieniają funkcje genu, ale jej nie pozbawiają.
Mutanty takie otrzymuje się poprzez mutagenezę chemiczną lub fizyczną (np. naświetlanie).
12. Mutanty środowiskowe (warunkowe):
Mutanty warunkowe to takie mutanty, u których produkt genu jest funkcjonalny tylko w pewncyh warunkach.
Najbardziej popularnym czynnikiem jest temperatura.
12.1 Temperatura jako czynnik selekcyjny:
Mutanty temperaturo wrażliwe (ts)- zmutowane wersja białka działa normalnie w niskiej temperaturze (25 stC), natomiast jest inaktywowana lub nieczynna w wysokiej temperaturze (37 stC).
Mutanty cold-sensitive (cs)- temperatura niższa (25 stC) jest dla nich restrykcyjna.
W badaniach, w których temperatura jest czynnikiem selekcyjnym komórki są namnażane w temperaturze umożliwiającej wzrost, następnie przenoszone do temperatury restrykcyjnej, gdzie poszukiwany jest interesujący nas fenotyp. Najczęściej stosowaną techniką jest REPLICA PLATING, dzięki której poszukujemy kolonii rosnących w temperaturze permisywnej, ale nie rosnących w temperaturze restrykcyjnej.
12.2 Replica plating - przebieg:
1) Wysiew drożdży na szalkę
2) Inkubowanie płytki w warunkach permisywnych
3) Czekamy aż wyrosną pojedyncze kolonie
4) Do otwartej płytki przykładamy bloczek pokryty specjalnym materiałem
5) Do tej tkaniny na bloczku przyklejają się komórki drożdży
6) Do takiego materiału przykładamy następnie kolejne płytki z np. różnymi podłożami czy inkubuje je się w innych temperaturach. Na podłożu rosną wszystkie odklejone z materiału a na ubogim w jakiś składnik tylko wybrane drobnoustroje (to samo tyczy się inkubowania w różnych warunkach temperaturowych)
7) Porównując wzrost na płytkach (odpowiednie przyłożenie, aby były kolonie umiejscowione na każdej płytce tak samo), wiemy który drożdż jest mutentem
12.3 Mutacje ts u drożdży:
Komórki posiadające mutacje ts w genach podziału komórkowego, w temperaturze restrykcyjnej mogą rosnąć, ale nie dzielić się, co prowadzi do powstawania komórek o odmiennej morfologii (komórki wydłużone).
Wskazuje to na zahamowanie w określonym punkcie podziału komórki (cell division ccle lub cdc).
Mutanty cdc u S.pombe i S.cerevisiae
U S. pombe mutanty takie są wydłużone
u S.cerevisiae mają odmienny wzór pączkowania, który odpowiada ich pozycji w cyklu komórkowym.
(…)
…, ale nie wchodzą w mitozę, wydęta komórka
Stosują barwienie komórek drożdży różnymi barwnikami można:
powiedzieć coś o mutacji
o zaburzeniach w cyklu komórkowym
np. wykorzystywany jest barwnik DAPI
…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)