elektroforeza sprawozdanie

Nr grupy: III Imię i nazwisko studenta: Beata Wojdak
Nazwisko prowadzącego: Dr Barbara Mickowska Data wykonania ćwiczenia: 17 .12.12 Tytuł ćwiczenia: Elektroforeza białek na żelu poliakrylamidowym w układzie Laemmli'ego.
Data oddania sprawozdania: 09.01.1 3 Zaliczenia/ ocena: Ws tęp teoretyczny: Elektroforeza jest ruchem fazy rozproszonej względem fazy rozpraszającej, zachodzącym pod wpływem przyłożonej zewnętrznie różnicy potencjałów elektrycznych. Istotę zjawiska elektroforezy stanowi wędrówka w polu elektrycznym cząsteczek mających dodatni lub ujemny ładunek elektryczny i proces rozdzielania tych cząsteczek na skutek różnicy szybkości ich wędrowania w roztworze bądź nośnikach. Nośnikami może być bibuła lub żele: skrobiowy, agarozowy, poliakrylamidowy. Elektroforeza żelowa pozwala uzyskać lepsze wyniki rozdziału mieszaniny związków niż bibułowa. Środowisko żelowe charakteryzuje się większą zdolnością rozdzielczą, ponieważ cząsteczki substancji analizowanej podlegają również „przesiewaniu molekularnemu”. Rolę sita spełniają oka sieci żelu.
SDS-PAGE jest to elektroforeza białek w żelu poliakrylamidowym w obecności SDS. Technika ta przebiega w warunkach denaturujących.
Cel ćwiczenia : Zastosowanie elektroforezy w warunkach denaturujących do wyznaczania masy cząsteczkowej białek.
Przebieg ćwiczenia: Przygotowano sześć próbek. Do pierwszej, drugiej, trzeciej i czwartej dano 5, 10, 15 i 20μl albuminy. Próbki zmieszano w stosunku 1:1 z buforem próbkowym. Do piątej próbki dano ekstrakt z białek orkiszu. Do szóstej dano markery mas cząsteczkowych białek. Wszystkie próbki wstawiono do termobloku (100 o C) na 5 minut. Płytki z gotowym spolimeryzowanym żelem zamontowano w aparacie do elektroforezy. Do aparatu wlano bufor elektrodowy i wyciągnięto grzebienie, przepłukano studzienki buforem elektrodowym. Do studzienek nałożono wszystkie przygotowane próbki. Elektroforezę prowadzono przy prądzie o mocy 100V do czasu, aż barwnik nie osiągnął żelu rozdzielającego, a następnie o mocy 180V, do czasu aż barwnik nie osiągnął końca żelu. Następnie żel utrwalano przez 30 minut w 50% metanolu i 10% kwasie octowym. Potem barwiono przez 2 godziny w 0,025% CBB R-250 w 10% kwasie octowym. Następnie odbarwiono w 10% kwasie octowym. Wyniki zamieszczono w tabelce (Tabela 1.). W tabelce 2 zestawiono wartości mas białek markerowych a także wyliczone z nich logarytmy (Tabela 2.). Tabela 3 zawiera wyniki wyliczonych ruchliwości elektroforetycznych (Tabela 3.), natomiast Tabela 4 posiada wartości odczytane z wykresu dla badanego białka (Tabela 4.). Na wykresie przedstawiono zależność ruchliwości elektroforetycznej (u) od logarytmu masy białek (logM) (Wykres 1.). Do sprawozdania załączone zostało zdjęcie żelu poliakrylamidowego z zaznaczonymi białkami (Obraz 1.).
... zobacz całą notatkę