To tylko jedna z 4 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Ćwiczenie 3. Amplifikacja PCR W 1983 roku Kary Mullis, amerykański biochemik, wynalazł fundamentalną dla biologii molekularnej technikę łańcuchowej reakcji polimerazy PCR (ang. Polymerase Chain Reaction ), która zrewolucjonizowała badania genetyczne. Celem PCR jest wyprodukowanie dużej ilości DNA z próby, zaczynając tylko od śladowej ilości. Te śladowe ilości genomowego DNA np. z pojedynczej cebulki włosowej, kropli krwi, czy innych płynów ustrojowych wystarczają do syntezy milionów kopii fragmentu DNA. Wynalezienie PCR odegrało bardzo duże rolę w czterech głównych obszarach badań genetycznych: mapowanie genów, klonowanie, sekwencjonowanie DNA i detekcja genów, między innymi w pracach nad genomem człowieka. Obecnie PCR używany jest jako narzędzie diagnostyczne do wykrywania mutacji, które mogą powodować choroby genetyczne. Wykorzystuje się go również w kryminalistyce oraz medycynie sądowej do identyfikacji na poziomie molekularnym osób podejrzanych o popełnienie przestępstwa. Na dzień dzisiejszy technika ta stosowana jest już na duża skalę w rolnictwie, w hodowli zwierząt i roślin. Powielenie konkretnego fragmentu DNA wymaga mieszaniny składającej się z następujących odczynników: sekwencji DNA, która będzie amplifikowana; poszczególnych zasad deoksyrybonukleotydów (A, T, G, C), które są podstawowymi jednostkami budulcowymi DNA; polimerazy Taq – enzymu, który składa nukleotydy w nową molekułę DNA; jonów magnezu – kofaktora potrzebnego polimerazie do stworzenia nowego łańcucha DNA; starterów – sztucznie syntetyzowanych krótkich fragmentów DNA komplementarnych do matrycy, będących punktem startu dla działania polimerazy; buforu – utrzymującego odpowiednie środowisko i pH dla działania polimerazy i przyłączania starterów. PCR wykorzystuje te same podstawowe procesy co komórka organizmu do skopiowania swojego DNA - hybrydyzacja komplementarnej nici DNA - synteza nici DNA poprzez polimerazę Taq Do rozpoczęcia procesu amplifikacji niezbędne są statery. Są to specjalnie zaprojektowane oligonuklotydy, które przyłączają się do końców sekwencji DNA interesującego nas genu i stanowią sygnał dla polimerazy do rozpoczęcia kopiowania DNA. Startery są to dwie krótkie pojedynczej nici DNA (ok. 20- 25 nukleotydów). Wyróżniamy dwa typy starterów: starter przedni (ang. forward) – jego sekwencja musi
(…)
… mleka kappakazeiny
Lista materiałów
- DNA wyizolowane na poprzednich ćwiczeniach
- woda dejonizowana
- bufor
- MgCl2
- dNTP
- polimeraza Taq
- sekwencje starterów dla kappakazeiny:
przedni (F) 5 ATCATTTATGGCCATTCCACCAAAG 3
wsteczny (R) 5 GCCCATTTCGCCTTCTCTGTAACAGA 3
- pipety P-2, P-10, P-20
- końcówki do pipet P-2, P-10, P-20
- marker laboratoryjny
- pojemnik na odpady
- rękawiczki laboratoryjne…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)