IDENTYFIKACJA GRUP NH2-KOŃCOWYCH I COOH-KOŃCOWYCH W PEPTYDACH:
1) Sposób oznaczania aminokwasu N-terminalnego w peptydach i białkach: Jedną z pierwszych czynności zaczynających procedurę poznawania nieznanego białka jest oznaczenie aminokwasów końcowych. Aminokwas N-końcowy określa się poprzez Narylowanie niepodstawionej grupy aminowej końcowego aminokwasu. Odczynnikiem wykorzystywanym w tej reakcji jest 2,4-dinitrofluorobenzen. Reszta 2,4-dinitrofenylowa przyłącza się do grupy aminowej aminokwasu N-terminalnego, podobnie jak i do innych wolnych grup aminowych łańcuchów bocznych aminokwasów zasadowych. Następnie arylowany peptyd poddaje się hydrolizie i za pomocą HPLC (wysokosprawnej chromatografii cieczowej) poszukuje się aminokwasu zawierającego resztę arylowa na grupie α-aminowej. Reszta arylowa nie tylko ułatwia zidentyfikowanie N-końcowego aminokwasu, ale również
zwiększa czułość jego detekcji za pomocą detektora UV. Za pomocą wzorców lub porównania widm UV moŜna zidentyfikować aminokwas arylowany w położeniu α (czyli N-terminalny) od aminokwasów wolnych i arylowanych w łańcuchu bocznym.
2) Sposób oznaczania aminokwasu C-terminalnego w peptydach i białkach:
Najprostszym sposobem zidentyfikowania aminokwasu C-terminalnego jest poddanie peptydu
(białka) hydrazynolizie. W wyniku tej reakcji wszystkie reszty aminokwasów tworzących łańcuch peptydowy, oprócz aminokwasu C-terminalnego, zostaną przekształcone w hydrazydy, a aminokwas z wolna grupą karboksylową utworzy z nią sól. Za pomocą HPLC nietrudno odróżnić wolny aminokwas od hydrazydów aminokwasów
(…)
… w tej reakcji jest 2,4-dinitrofluorobenzen. Reszta 2,4-dinitrofenylowa przyłącza się do grupy aminowej aminokwasu N-terminalnego, podobnie jak i do innych wolnych grup aminowych łańcuchów bocznych aminokwasów zasadowych. Następnie arylowany peptyd poddaje się hydrolizie i za pomocą HPLC (wysokosprawnej chromatografii cieczowej) poszukuje się aminokwasu zawierającego resztę arylowa na grupie α-aminowej. Reszta…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)