Wyznaczanie punktu izoelektrycznego kazeiny pH

Nasza ocena:

3
Pobrań: 4725
Wyświetleń: 15925
Komentarze: 0
Notatek.pl

Pobierz ten dokument za darmo

Pobierz notatkę
Podgląd dokumentu
Wyznaczanie punktu izoelektrycznego kazeiny pH - strona 1 Wyznaczanie punktu izoelektrycznego kazeiny pH - strona 2 Wyznaczanie punktu izoelektrycznego kazeiny pH - strona 3

Fragment notatki:


Biochemia – sprawozdanie 2     4.1.2. Wyznaczanie punktu izoelektrycznego kazeiny pH      Opis doświadczenia  Przygotowujemy 9 probówek  Do pierwszej dodajemy 3,2 cm3 1M kwasu octowego i 6,8 cm3 wody. Do  pozostałych probówek dodajemy 5 cm3 wody.   Z pierwszej probówki przenosimy 5 cm3 roztworu do drugiej, następnie to  samo robimy z drugą i trzecia itd.   Do każdej probówki dodajemy 1 cm3 roztworu kazeiny i mieszamy.   Wyniki obserwacji zapisujemy do tabeli     Obserwacje Nr probówki Ilość 1M CH3COOH pH roztworu  Zmętnienie/osad Bezpośrednio po dodaniu białka Po 30 min 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1.6 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.025 0.012 0.006 3.5 3.8 4.1 4.4 4.7 5.0 5.3 5.6 5.9 - + ++ +++ + + + - - - + ++ +++ ++ + + - - (-)      - brak zmętnienia i osadu (+)     - zmętnienie (++)   - zmętnienie i osad (+++) – zmętnienie z największą ilością osadu   Wnioski Punkt izoelektryczny kazeiny, tj. najmniejsza rozpuszczalność, występuje przy pH 4.4.  Wniosek ten można wysnuć na podstawie tego, że w probówce nr 4, przy pH 4.4, wytrącił się  najobfitszy osad.    4.1.3. Wykazanie właściwości buforujących białek na podstawie kazeiny     Opis doświadczenia  Przygotowujemy dwie kolbki stożkowe   Napełniamy je; pierwszą 24 cm3 0.9% roztworem NaCl, drugą 24 cm3 4%  roztworu kazeiny w 0.9% roztworze NaCl.  Do obu kolb dodajemy parę kropli fenoloftaleiny   Oba roztwory miareczkujemy 0.05 M NaOH aż do zmiany zabarwienia      Obserwacje Roztwór NaCl zmienił barwę po dodaniu 0,2 ml NaOH, natomiast roztwór z kazeiną po  dodaniu 2,5 NaOH.      Wnioski Obecność grup aminowej i karboksylowej determinuje u białek właściwości buforujące. W  zależności od roztworu wykazują właściwości zasadowe albo kwasowe, co jest niezwykle  ważne w utrzymaniu stałego pH organizmu.    4.2.1. Wytrącanie białek z wyciągu wodnego ziemniaka    Opis doświadczenia  Ziemniak obieramy i ucieramy na tarce. Do miazgi dodajemy 100 cm3 wody,  mieszamy  Po 10 minutach przesączamy przez fałdowany sączek  Przygotowujemy pięć probówek i do każdej dodajemy około 3 cm3 próbki  ziemniaka  Do pierwszej probówki dodajemy krystaliczny siarczan amonu aż do nasycenia  Do drugiej dodajemy równą objętość etanolu  Do trzeciej kilka kropli kwasu trichlorooctowego  Do czwartej kilka kropli roztworu octanu ołowiu   Zawartość piątek zagotowujemy   Sprawdzamy które procesy są odwracalne poprzez rozcieńczenie wodą     Obserwacje W pierwszych czterech przypadkach nastąpiło zmętnienie, w piątym doszło do wytrącenia 

(…)

… od środka, kilkakrotnie małymi porcjami. Spryskujemy bibułkę
ninhydryną.


Obserwacje
Aminokwasy zmieniły barwę na fioletową i stały się widoczne.
 Obliczenia
Rf1=3,5/5=0,7 => Leucyna
Rf2=1,5/5=0,3 => Histydyna
Aminokwasy
Walina
Glicyna
Leucyna
Fenyloalanina
Kw. Glutaminowy
Histydyna
Rf
0.59
0.34
0.72
0.68
0.38
0.3
 Wnioski
 Wykryte aminokwasy to histydyna i leucyna
 Ninhydryna pozwala na wykrywanie…
... zobacz całą notatkę



Komentarze użytkowników (0)

Zaloguj się, aby dodać komentarz