To tylko jedna z 3 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Laboratorium biochemii
Amfoteryczny charakter białek i aminokwasów (ćw. I)
Cel ćwiczenia
Wykonanie krzywych miareczkowania kwasu glutaminowego i glicyny,
Określenie punktów izoelektrycznych, pK grup funkcyjnych i przedziałów buforowania tych aminokwasów,
Wyznaczenie punktu izoelektrycznego kazeiny. Odczynniki
1M NaOH
1M HCl
Wodny roztwór 0.1M glicyny
Wodny roztwór 0.05M kwasu glutaminowego
1 M kwas octowy
0.1 M CH3COONa zawierający kazeinę w końcowym stężeniu 0.2%
Bufory wzorcowe do kalibracji pehametru o pH 4.01, 7.01, 9.18
Szkło i aparatura
Probówki chemiczne na 20 ml i na 5 ml
Pipety automatyczne oraz tipsy
Pipety szklane
Cylinder miarowy
Zlewki o pojemności 50ml
Mieszadło magnetyczne
Mieszadełka magnetyczne małe i duże
Pehametr laboratoryjny z elektrodą
Wykonanie ćwiczenia
Wyznaczanie punktu izoelektrycznego kazeiny
Wykalibrowano pehametr za pomocą buforów wzorcowych o pH 4.01, 7.01, 9.18, każdorazowo płucząc elektrodę wodą destylowaną,
Przygotowano 18 suchych probówek chemicznych oraz stoper,
W 9 ponumerowanych probówkach dużych przygotowano serię rozcieńczeń kwasu octowego wg schematu:
1 probówka: 13.6 ml H2Odest + 6.4ml 1M CH3COOH
2 probówka: 5.0ml H2Odest + 5.0ml próbki 1
3 probówka : 5.0ml H2Odest + 5.0ml próbki 2
(…)
9 probówka: 5.0ml H2Odest + 5.0ml próbki 8
W pierwszej i ostatniej probówce wyrównano objętość do 5 ml,
Do 9 kolejnych małych probówek chemicznych odmierzono po 3ml przygotowanych rozcieńczeń kwasu octowego
Zmierzono pH każdego z roztworów, umieszczając elektrodę bezpośrednio w małych probówkach, odczytane wartości zanotowano w tabeli 1.,
Przelano roztwory z małych probówek do dużych, Do każdego rozcieńczenia (1-9) dodano po 1 ml 0.2% roztworu kazeiny i włączono stoper,
Wymieszano mieszaniny,
Zbadano wygląd prób białka i zanotowano obserwacje,
Odstawiono próby kazeiny do intubacji w temperaturze pokojowej na 30min,
Wygląd prób ponownie zbadano i zanotowano obserwacje po czasie inkubacji.
Miareczkowanie kontrolne wody
Do czystej zlewki o pojemności 50 ml odmierzono 40 ml wody destylowanej,
Umieszczono w wodzie czyste mieszadełko magnetyczne,
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)