Ultrawirowanie-opracowanie

Nasza ocena:

3
Pobrań: 77
Wyświetleń: 1225
Komentarze: 0
Notatek.pl

Pobierz ten dokument za darmo

Podgląd dokumentu
Ultrawirowanie-opracowanie - strona 1 Ultrawirowanie-opracowanie - strona 2 Ultrawirowanie-opracowanie - strona 3

Fragment notatki:

Biofizyka, wykład 3
Metody wyznaczania mas cząsteczkowych cząsteczkowych separacji cząsteczek na podstawie różnic mas:
- ultrawirowanie
-elektroforeza żelowa i kapilarna
- spektroskopia mas
Metody wyznaczania struktur przestrzennych przestrzennych rozdzielczością atomową:
- dyfrakcja promieniowania Rentgena (rentgenografia)
- magnetyczny rezonans jądrowy (NMR)
Metody określania kształtu makrocząsteczek:
- mikroskopia sił atomowych (AFM)
Metody badania dynamiki ruchów molekularnych:
- magnetyczny rezonans jądrowy (NMR) i inne metody spektroskopowe (fluorescencyjne)
- komputerowa symulacja dynamiki molekularnej (MD)
Ultrawirowanie
S - współczynnik sedymentacji
Masa cząsteczkowa M=RTS/[D(1-vd)
D- współczynnik dyfuzji
v- objętość właściwa cząsteczki
d- gęstość rozpuszczalnika
T-temperatura
S=W/(ω2r)
ω - około 50 000 rmp (obrotów na minutę)
1 s (swedberg) = 10-13s
Prawo Lamberta-Beera ln(I0/I) = ε(v)cl
W takim wirowaniu uzyskuje się gradient substancji. Czasem wiruje się z mniejszą prędkością 5 000 rpm, wtedy ustala się równowaga sedymentacyjna (substancje nie „przykleja się” do ścianki) - można uzyskać stały profil stężeń.
Wirowanie w gradiencie stężeń (sacharozy, chlorku cezu) - zmniejsza konwekcję i dyfuzję, dzięki czemu uzyskujemy gradient skokowy stężenia substancji, uzyskujemy cienkie pasma poszczególnych substancji.
W doświadczeniu wykorzystującym ultrawirowanie udowodniono semikonserwatywność replikacji.
Elektroforeza żelowa
SDS PAGE Migracja w polu elektrycznym zależy od masy cząsteczek.
Żele - polimery o różnym stopniu usieciowania - im większy stopień usieciowania tym mniejsza wielkość „oczek” w żelu, którymi wędrują substancje
Czemu nie stosujemy migracji w samym buforze, ale w żelu? - Żel podnosi zdolność separacji pod względem masy cząsteczkowej
Stosuje się stałe pole elektryczne o różnicy potencjałów około 200V
ruchliwość elektroforetyczna μ=W/E W~(E*g)/f
W - prędkość migracji
E- natężenie pola elektrycznego
g - ładunek
f - współczynnik tarcia (zależy od masy cząsteczki i lepkości roztworu, również od kształtu cząsteczki)


(…)

…=Buforu
Cząsteczki ujemne V<Buforu
Elektroforeza kapilarna łatwiejsza w automatyzacji niż elektroforeza żelowa
Spektroskopia masowa
Spektroskopia mas nano- i subnanogramowych ilości substancji, czułość metody bardzo duża - dokładność do 0,0001%. Można analizować składy izotopowe.
Cząsteczki trzeba przeprowadzić w stan gazowy i naładować = DESORPCJA - ten proces nie jest obojętny dla cząsteczki…
... zobacz całą notatkę

Komentarze użytkowników (0)

Zaloguj się, aby dodać komentarz