Sprawozdanie-wyznaczanie współczynnika podziału wybranych zanieczyszczeń organicznych metoda HPLC i obliczeniowa

Sprawozdanie z ćwiczenia nr 2 Temat :   Wyznaczanie   współczynnika   podziału   wybranych   zanieczyszczeń   organicznych  środowiska metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej i metodą obliczeniową. Wstęp teoretyczny : Współczynnik podziału P oblicza się według wzoru:  P  = C okt C w Współczynnik ten świadczy o tym, czy substancja jest hydrofobowa czy hydrofilowa,  z tego można wywnioskować w jakich komponentach środowiska może się znajdować, czy  będzie   ulegać   bioakumulacji,   biokoncentracji   czy   też   biomagnifikacji   oraz   czy   będzie  podlegała   sorpcji   glebowej.   Do   wyznaczenia   współczynnika   można   użyć   metody  wysokosprawnej chromatografii cieczowej HPLC lub metody obliczeniowej.  Jest ścisła zależność pomiędzy współczynnikiem log P, a parametrami retencji  analizy w HPLC w odwróconym układzie faz (faza stacjonarna – niepolarna, faza ruchoma –  polarna). Zakłada się, że retencja związku w odwróconym układzie faz jest proporcjonalna do  współczynnika   podziału.   Jednak   nie   jest   możliwe   użycie   wyłącznie   polarnego  rozpuszczalnika, ze względów praktycznych, gdyż im związek bardziej lipofilowy tym dłużej  zostaje w kolumnie,  dlatego w tej metodzie stosuje się modyfikator,  najczęściej metanol.  Dowiedziono,   że   istnieje   liniowa   zależność   między   współczynnikiem   podziału   a czasem  retencji: log P = a log tR + b Współczynniki   a   i   b   są   charakterystyczne   dla   danej   grupy   związków.   Ze   względu   na  stosowany modyfikator w HPLC, do wyznaczenia współczynnika podziału używa się metody  ekstrapolacyjnej   czyli   wyznaczeniu   czasów   retencji   dla   kilku   faz   ruchomych   o   różnej  zawartości metanolu. Wykreślana jest następnie liniowa zależność na podstawie równania  Snydera-Soczewińskiego: log k = log kw – SΦ gdzie: k = (tR – t0)/t0 ; t0 oznacza czas martwy, tR czas retencji; kw – współczynnik retencji fazy  zawierającej tylko wodę; S – nachylenie prostej; Φ – udział metanolu w fazie ruchomej. Do obliczenia współczynnika podział stosuje się także metodę obliczeniową, gdzie wartość  log P liczy się jako sumę wartości odpowiadającej jej cząsteczkom, dla których znany jest  przyrost   log   P.   Można   wyróżnić   różne   metody   obliczenia:   podstawienia   hydrofobowego,  Rekkera i Hansach-Leo. Opis doświadczenia: Zapoznano się z podstawowymi elementami zestawu HPLC i jego funkcjonowaniem. 

(…)

… o objętości 200 ml zawierających: 45, 55, 65 i 75 % objętościowych
metanolu. Roztwory zostały odgazowane na łaźni ultradźwiękowej.
Następnie wykonano analizę substancji: fenolu, o-nitrofenolu, aniliny o stężeniu
1mM/dm3, dla każdej z faz ruchomych wykonując nastrzyk 50 μl za każdym razem. Przy
zmianie fazy ruchomych wykonano analizę wody destylowanej. Podczas wykonywanej
analizy HPLC obliczono współczynniki…
... zobacz całą notatkę