Notatka porusza miezy innymi zgadanienia takie jak: Laboratorium biochemii Profil Topnienia DNA (ćw K.) Cel ćwiczenia:
Wykreślenie profilu topnienia roztworu kwasu dezoksyrybonukleinowego z grasicy cielęcej,
Wyznaczanie temperatury topnienia i przedziału temperaturowego denaturacji badanej próbki DNA, stopnia przeprowadzonej denaturacji DNA oraz hipochromizmu punktowego.
Odczynniki
Roztwór SSC pH=7,0 (15mM NaCl, 1,5mM cytrynian sodu),
Próbka kwasu dezoksyrybonukleinowego - roztwór DNA w SSC,
Olej parafinowy.
Szkło i aparatura
Pipety automatyczne oraz tipsy,
Kuwety plastikowe,
Kuwety kwarcowe,
Spektrofotometr z termostatującą przystawką i mieszadłem magnetycznym,
Termostat,
Mieszadełko magnetyczne.
Wykonanie ćwiczenia
Do dwóch kuwet kwarcowych dodano po 3 ml 0,1 M roztworu SSC i wyzerowano spektrofotometr względem tych roztworów,
Z kuwety „próbka” wylano roztwór SSC, następnie dodano 3 ml otrzymanego roztworu DNA wyizolowanego z grasicy cielęcej z ćwiczenia J,
Zmierzono absorbancję roztworu DNA przy długości fali 260 nm oraz 280 nm, wyniki zamieszczono w Tabeli 1.,
Na powierzchnię roztworu w obu kuwetach ostrożnie nawarstwiono olej parafinowy, Rozpoczęto ogrzewanie próbek w spektrofotometrze, Obliczenia i wyniki
Tabela 1. - absorbancja natywnej formy DNA
Obliczanie stężenia badanego DNA:
Obliczanie czystości DNA:
Obliczanie wartości ΔA260 dla każdego kroku denaturacji (obliczenia na kroku 1. pozostałe analogicznie):
gdzie: = 0,756169 - 0,7505 = 0,005669 Obliczanie średniej absorbancji roztworu DNA w kolejnych krokach denaturacji (obliczenia na kroku 1. pozostałe analogicznie):
Obliczanie zmiany absorbancji jaka przypada na zmianę temperatury roztworu DNA ΔT (obliczenia na kroku 1. pozostałe analogicznie):
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)