To tylko jedna z 2 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Określenie zmian morfologicznych i liczebności komórek traktowanych różnymi stężeniami sulforafanu i nokodazolu w porównaniu z komórkami kontrolnymi. Przeżywalność komórek w próbce kontrolnej była najwyższa ze wszystkich obserwowanych płytek. Komórki na płytce kontrolnej tworzyły dużą kolonię. Pod wpływem sulforafanu i nokodazolu spadała liczebność żywych komórek. Im stężenie sulforafanu i nokodazolu było większe tym stopień ich przeżywalności był mniejszy .Sulforafan 80uM- komórki mniejsze tego samego kształtu jest mniej komórek niż w próbówce kontrolnej. Większość komórek jest żywych. Sulforafan 120uM - Coraz mniej komórek żywych, w większości są komórki martwe. Sulforafan 150uM- Wszystkie komórki martwe. Nokodazol 0,4uM- komórki duże większe niż w próbce kontrolnej. Większość komórek żywych.
Nokodazol 0,4uM- Pojawiają się komórki martwe, ale w mniejszej ilości niż w sulforafanie 120uM . Nokodazol 1,2uM- W pływa na śmiertelność komórek ,ale nie w takim stopniu jak sulforafan 150uM.
ĆWICZENIE 2. Określenie morfologii komórek i stopnia zahamowania wzrostu komórek przez sulforafan i nokodazol z zastosowaniem barwienia błękitu trypanu. Obiektem moich badań były komórki traktowane 0,8 nM Nokodazolem. Na początku ćwiczenia zebrałam pożywkę z płytki do probówek. Następnie przemyłam płytkę 1ml trypsyny o stężeniu 0,25% w celu odczepienia komórek od powierzchni płytki. Trypsyna nadtrawia macierz zewnątrzkomórkową umożliwiając odklejenie się komórek. Po przepłukaniu dodałam 1 ml trypsyny i inkubowałam około 5-10 minut w temperaturze 37ºC. Następnie rozpipetowałam komórki i przeniosłam do probówek z pobraną pożywką. Po rozpipetowaniu probówka wirowała się ok. 10 minut. Następnie odciągnęłam supernatant. Do osadu znajdującego się na dnie probówki dodałam 1 ml buforu Hepes i również rozpipetowałam komórki. Do probówki Ependorfa pobrałam 20 µl komórek i 20 µl błękitu trypanu. Następnie inkubowałam ok. 20 minut. Liczenie komórek pod mikroskopem (0,8 nM Nokodazol): Martwe ( zabarwione) - 3 Żywe ( nie zabarwione) - 5 Przeżywalność: 5/8· 100%= 62,5% Liczenie komórek z użyciem hemocytometru: Na skraj szkiełka nakrywkowego nakropiłam 10 µl zawiesiny. Przeniosłam hemocytometr pod mikroskop w celu zliczenia komórek. Liczba komórek w 1 ml: 1) objętość komory : 1/25mm 2 ·16·0,1mm = 0,064mm 3 2) ilość komórek : 100·5/0,064·2= 15625
1000-----x
0,064----5
X=78125*2=15625=1,5*10(do potęgi piątej)
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)