Genetyka molekularna wykład 10
Hybrydyzacja z sondami molekularnymi - analiza restrykcyjna
Hybrydyzacja z sondami molekularnymi - wykrywanie rekombinantów
Filtr nitrocelulozowy - nałożyć filtr na płytkę z oddzielonymi koloniami bakterii - dalszy wzrost płytka - owrócony filtr umieścić na nowej płytce agarem, wzrost kolonii bakterii - replika płytki na świezym agarze - filtr z przytwierdzonymi koloniami zanurzać w kolejnych buforach - denaturacja, neutralizacja przemywanie, suszenie DNA i wiązanie - DNA bakterii związany na filtrze - hubrdyzacja ze znakowana sondą, przemywane, autoradiografia, - klisza fotograficzna, - identyfikacja pozytywnych kolonii i przeniesienie do pożywek płynnych płytka oryginalna -, identyfikacja pozytywnych kolonii i przeniesienie do pożywek płynnych - namnażacie w hodowli płynnej
Transfer northerna - sondy molekularne do badań RNA
Badany DNA - nakładanie do kiszonek na denaturującym żelu agarozowy - migracja - przeniesienie na filtr nitrocelulozowy - przeniesienie RNA na filtr - hybrydyzacja sondy z unieruchomionym RNA - usuwanie nadmiaru sondy molekularnej - nałożenie kliszy fotograficznej - wywołanie kliszy
filtr może być używany wielokrotnie z różnymi sondami Hybrydyzacja z sondami molekularnymi - macierze - mapowanie fizyczne
Mikromacierz DNA o powierzchni 1cm2 zawierająca 1046 klonów z biblioteki cDNA komórek krwi. Sondę cDNA wyznakowaną fluorescencyjnie stanowi cDNA szpiku kostnego, przygotowany zastosowaniem odwrotnej traskryptazy. Odczytu dokonano z zastosowaniem mikroskopu konfokalnego. Hybrydyzacja sondami molekularnymi - Mikormacierze DNA
źródło światła - fotomaska - wrażliwe na światło grupy chroniące - płytka szklana ze struktura siatki - synteza T- - powtarzające się etapy ochrony przed światłem i syntezy - synteza
Powstawanie macierzy oligonukleotydowej w wyniku fotolitografii oraz syntezy in situ oligonukleotydów. Miejsca syntezy stają się aktywne po naświetleniu, co umożliwia syntezę określonych, specyficznych oligonukleotydów.
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)