To tylko jedna z 2 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Genetyka klasyczna i analiza mutantów:
Celem prowadzenia badań genetycznych jest zidentyfikowanie i poznanie podłoża genetycznego procesów, a także przewidywanie jak będzie zachowywał się mutant, który nie będzie zdolny do przeprowadzenia interesującego nas procesu.
8.1 Haploidalność drożdży - ważna cecha, ponieważ umożliwia:
Otrzymywanie mutacji recesywnych (utrata funkcji danej alleli). Jest to bardzo przydatne w poznawaniu funkcji danego genu (widać efekt)
Całkowita utrata funkcji danego genu (tzw null mutacje). Geny mogą być unieczynnione (disrupted) przy zastosowaniu konstruktów, które zawierają marker auksotroficzny lub oporności na lek i sekwencje homologiczne. Jeśli nie znamy żadnych sekwencji homologicznych, to wtedy konstrukt może zintegrować się przypadkowo w genomie.
8.2 Mutacje null polegają na całkowitej utracie funkcji:
Gen z markerem i sekwencjami flankującymi, które są homologiczne do fragmentu genomu
Daje to możliwość rekombinacji fragmentów (wymianę) w komórkach drożdży. 1) Dany gen może być unieczynniony z zastosowaniem konstruktu, który ma marker odżywczy lub oporności na lek i sekwencje homologiczne
2) Jeśli zastosujemy sekwencje nie specyficzne dla danego genu to konstrukt zintegruje się przypadkowo w genomie.
8.3 Jak zachodzi rekombinacja homologiczna?:
8.4 Mutageneza inercyjna:
Ostatnio u drożdży stosowana jest technika, która jest zbliżona do rekombinacji heterologicznej.
+ łatwość identyfikacji interesujących nas genów, które są naznaczone poprzez wstawioną kasetę
- geny niezbędne do życia nie mogą być badane, ponieważ mutacje będą śmiertelne
Technika te jest użyteczna tylko dla genów, które nie są niezbędne do życia (np. mejoza), genów „zbytecznych” oraz genów, których aktywność jest zależna od dawki.
U drożdży
nawet mutacje letalne mogą być podtrzymywane, jeśli oprócz zmutowanej kopii genu jest także obecna kopia genu charakterystycznego dla typu dzikiego. Można tego dokonać wykorzystując w badaniach diploidalne heterozygoty
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)