Transformacje:
Konidia Protoplasty Inkubacja z wprowadzonym DNA lub wstrzeliwanie Wysiew na podłoża selekcyjne ze stabilizatorem osmotycznym (żeby nie pękały protoplasty)
5.1 Markery selekcyjne:
Higromycyna:
Gen bakteryjny fosforylazy higromycynowej. Produkt tego genu daje oporność na higromycynę higR Benomyl:
Czynnik antytubulinowy
Wykorzystuje sekwencję bml (wariant genu beta-tubuliny, która nadaje oporność na benomyl)
5.2 Transformacja u N. crassa:
Większość transformantów jest nieudanych, gdyż transformowane DNA nie jest stabilnie integrowane do DNA chromosomalnego.
Stabilne transformaty to tylko 10%, z czego tylko 3-5% to integracja homologiczna (czyli w wymagane miejsce).
5.3 Dwa systemy napraw usuwające fotoprodukty:
Dimery pirymidynowe
Fotoprodukty 6-4
5.4 Typy płciowe Neurospora:
1) Bipolarny heterotallizm:
Obecność typów płciowych A i a (geny są obecne w 1 kopii w genomie N.crassa, N.sitophila, N.intermedia)
2) Wtórny homotalizm (pseudohomotallizm):
Produkcja worków zawierających 4 askospory- N.tetrasperma
3) Podstawowy homotalizm:
a) Każdy genom haploidalny niesie informację genetyczną obu typów płciowych (N.terricola, N.pannonica)
b) każdy genom haploidalny niesie informację genetyczną jednego typu płciowego (N.africana)
Geny typów płciowych to są idiomorfy, a nie allele.
Niezgodność wegetatywna:
Odcinanie ścianą komórkową kiedy zleją się dwie strzępki o różnych typach płciowych, które są niezgodne wegetatywnie
Nie ma tu zgodności heterokariony i szkodziłoby to komórce.
5.5 Populacje naturalne Neurospora:
4600 naturalnych izolatów
Równa częstość występowania obydwu typów płciowych
Kultury heterotalliczne nie są samozapładnialne
Izolaty z różnych terenów różnią się pod wzg genetycznych (niezgodność wegetatywna i płciowa)
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)