Laboratorium 11. Wpływ czynników chemicznych na drobnoustroje Wyniki z poprzednich laboratoriów: ani E. Coli ani B. Subtilis nie zostały zabite w żadnej z badanych temperatur w ciagu 10 minut, choć ich wzrost został ograniczony. Geobacillus stearothermophilus (?) - kontrola procesu sterylizacji; sporal (polski produkt) - mała saszetka ze sporami Geobacillusa; nie przeżywa ona 121°C przez 15 minut; jeśli sterylizacja przebiegła prawidłowo, to one nie przeżyją; a jeśli nieprawidłowo (np. przez spadek napięcia spadnie temperatura choć na chwilę), to pojedyncze przetrwalniki wykiełkują po zalaniu agarem; b. oporne na wysoką temperaturę są bakterie gramujemne; S. Marscescens mogłaby nie przeżyć; E. Coli zginęły po 40 minutach, B. Subtilis nawet po 40 min nadal żyły. UV: E. Coli zginęło po 90s; zjawisko: gdy się krótko naświetla, to giną, a gdy dłużej to mogą przeżyć, możliwe, że kiedy krótko naświetlamy, to bakteria nie zdąży uruchomić swoich mechanizmów ochronnych, a gdy czas naświetlania wydłużymy, to mogą zdążyć je uruchomić i przeżyć; antybiotyki - naświetla się bakterie, tworząc mutanty, które produkują antybiotyki, ale gdy są „zbyt zmutowane” to mogą po kilku posiewach zginąć, więc lepiej mieć mniej zmutowane (produkujące mniejsze ilości), ale żyjące dłużej. Bacillus i Luteus nie wysychają, Marscescens wysycha.
Ćwiczenia:
Ćw. 1 Wpływ pH Rozlać do 5 probówek po 5 ml bulionów o pH 3, 5, 7, 9 i 10 i zasiać (100 μl) dowolnie wybraną bakterię (P. Fluorescens). Zostawić do inkubacji. Bakterie najlepiej rosną w pH obojętnym, ale mogą też rosnąć w skrajnych (ekstremofile); zwykle bakterie wolą mocno alkaliczne niż mocno kwaśne pH. wyniki: W pH 3 nie urosły, w pozostałych tak.
Ćw. 2. wpływ barwników (fioletu krystalicznego) Wylać po 1 ml rozcieńczeń 1:100 i 1:500 fioletu na czyste, puste szalki Petriego. (można jednym tipsem, najpierw 1:500, potem 1:100) Zalać gorącym, upłynnionym agarem (z aparatu Kocha). Delikatnie poruszać płytką w celu dokładniejszego rozprowadzenia. Zostawić do zastygnięcia. Podzielić denko na 4 części, w każdej zasiać inną bakterię (S. Marscescens, E. Coli, P. Fluorescens, M. Luteus). Tak samo zrobić na drugiej płytce. Ezą siać bardzo delikatnie (świeżo zastygnięty agar z barwnikiem może się łatwo uszkodzić). fiolet krystaliczny (pioctamina) - bdb środek przeciwbakteryjny, kiedyś stosowany na rany, chore gardło czy dziąsła; wyniki: 1:500 urosły wszystkie, ale niektóre słabo (E. Coli), 1:100 słabo rosły; rozcieńczenie fioletu na płytce było 10x większe niż podane wcześniej. Ćw. 3. Sporządzanie antybiotygramu Wylać 1 ml dowolnie wybranej bakterii (P. Fluorescens) na podłoże Műllera - Hintona (NH). Rozlać dokładnie po całej płytce, potem położyć ją pod skosem, żeby nadmiar bakterii spłynął, poczekać 3 minuty. Pęsetę do spirytusu i w ogień. Nałożyć w odstępach 4 antybiotyki:
(…)
… do kwasu p-aminobenzoesowego (PABA), który jet pobierany przez liczne bakterie do syntezy kwasu foliowego. Sulfonamidy hamują więc wzrost tych komórek, które same syntetyzują kwas foliowy. Z punktu widzenia efektu sulfonamidu można podzielić bakterie na 3 grupy: - gramujemne bakterie, które nie mogą pobierać gotowego kwasu foliowego wskutek czego ich wzrost jest zahamowany przez sulfonamid; proces jest odwracalny przez dodanie kwasu foliowego; - gramdodatnie bakterie, które nie pobierają gotowego kwasu foliowego (hamowanie ich wzrostu przez sulfonamidy jest odwracalne przez dodanie kwasu foliowego); - gramdodatnie bakterie, które pobierają gotowy kwas foliowy i nie są wrażliwe na sulfonamidy; W wielu przypadkach kombinacja sulfonamidów i antybiotyków daje lepsze efekty niż stosowanie ich oddzielnie…
… komórkowych. Bakterie gramdodatnie są bardziej wrażliwe niż gramujemne (wyjątek - bakterie kwasooporne). Bakteriostatyczne działanie barwników jest wykorzystywane do sporządzania pożywek wybiórczych.
Środki dezynfekcyjne: 1. Kwasy - mocne kwasy są bardziej bakteriobójcze; 2. Alkalia (zasady) - działanie zależy od stopnia dysocjacji, specjalnie toksyczne są KOH, NaOH, LiOH, NH4OH; 3. Sole - w małym stężeniu…
…% i 2% 3) fenol 1%, 2% i 5% Wlać po 5ml do probówki, włożyć na 3-5 minut do łaźni 37°C, potem wlać 0,5 ml E. Coli, starannie wymieszać i wstawić do łaźni na 30 minut. Pobrać po 100μl próbki i zaszczepić do podłoża laktozowego (do fermentacji cukrów). Jest zielone (inny barwnik niż wcześniej). Jeśli E. Coli przeżyje, to sfermentuje laktozę. wyniki: Etanol 70% ma lepsze właściwości dezynfekcyjne niż 96…
… i krezole stosowane jako środki bakteriobójcze. Większość związków z tej grupy jest słabo rozpuszczalnych w wodzie i dlatego są stosowane w postaci emulsji (lizol - roztwór orto, meta i para krezolu w mydle).
Detergenty substancje powierzchniowo czynne, działają przez zmiany napięcia powierzchniowego. W zależności od rodzaju części hydrofilowej: - anionowe - mało toksyczne (stosowane w przemyśle…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)