To tylko jedna z 2 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
TRANSFORMACJA A. TUMEFACIENS
Transformacja polega na wprowadzeniu jednego lub kilku genów celem uzyskania pożądanych cech. Głównie transformuje się rośliny uprawne aby zwiększyć wydajność plonów, zwiększyć odporność roślin na herbicydy, owady czy choroby wirusowe. Metoda transformacji za pomocą Agrobacterium tumefaciens jest to metoda transformacji pośrednia, polegająca na przekazywaniu plazmidu do komórek roślinnych za pośrednictwem tych bakterii. Bakterie te powodują guzowatość roślin dwuliściennych. Jest to najpowszechniejsza metoda do transformacji. Agrobacterium jest to drobnoustrój glebowy, zawierający mega plazmidy o rozmiarze 200Mbp. W obrębie plazmidu mieszczą się geny i fragment T-DNA który ma zdolność do oddzielenia się od plazmidu i migracji do komórek roślinnych, wniknięcia i integracji z genomem roślin, gdzie T-DNA z wstawionym pożądanym genem ulega ekspresji. O zjadliwości Agrobacterium decyduje plazmid Ti, w którym występuje region T odpowiedzialny za transformacją, ograniczony lewą i prawą granica T-DNA (pomiędzy granicami jest przenoszony fragment) oraz region wirulencji, w którym są geny vir odpowiedzialne za przekazywanie fragmentu plazmidu do komórek biorcy. Plazmid ten występuje w formie autonomicznej, ma miejsce inicjacji replikacji. Zawiera onkogeny, które są odpowiedzialne za wytwarzanie auksyn i cytokinin. Zawiera też geny odpowiedzialne za syntezę opin. W naturze T-DNA niesie zespół onkogenów i genów katabolizmu opin, których ekspresja w komórkach roślin prowadzi do neoplastycznego wzrostu transformowanych tkanek i produkcji opis, które są pochodnymi aminokwasów, które są wykorzystywane przez bakterie jako źródło pożywienia. Rekombinowane szczepy Agrobacterium- u nich natywny T-DNA został zastąpiony pożądanymi genami
.Molekularna maszyneria do transportu i produkcja T-DNA obejmuję białka kodowane przez zespół chromosomowych genów bakterii chv i plazmidowych wirulencji vir, uczestniczy tu też wiele białek gospodarza, ale w końcowych etapach procesu tj. wewnątrz komórkowego transportu, importu jądrowego i integracji z genomem roślin. Etapy:
1) Ekspresja genów vir (znajdujących się w bakteryjnym plazmidzie Ti) -po aktywacji gospodarza przez wydzielanie związków fenolowych na skutek zranienia (na skutek mechanicznego zranienia wydzielane są przez rośliny związki fenolowe, które powodują zwabienie bakterii) lub na skutek sztucznego dodania związku fenolowego. Dochodzi do rozpoznania komórka-komórka. - Cząsteczki sygnałowe są rozpoznawane przez dimerowy transmembranowy kompleks reporterowy VirA-ChvE. -Aktywacja VirA przez autofosforylację. -Fosforylacja cytoplazmatycznego VirG przez autofosforylowany VirA.
- Zaktywowany VirG przyłącza się do regionów regulatorowych innych operonów vir, działając jako aktywator transkrypcji.
(…)
…. System ten kodowany jest przez operon virB i gen virD4
TSS4 jest to model jednoetapowy, Sec zależny. Sekrecja DNA zachodzi bez pośrednictwa peryplazmtycznego. Białka VirB4 i VirB11 posiadają aktywność wiązania nukleotydów i są źródłem energii dla sekrecji. Lipoproteina VirB7 tworzy kompleks z VirB9 poprzez wiązanie dwusiarczkowe, który może umocować aparat typu IV w OM. 7) Dla eksportu T-DNA z 11 białek…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)