Biochemia – sprawozdanie 7 8.2.1. Oznaczanie aktywności β-amylazy metodą Noeltinga i Bernfelda w ziarnie pszenicy Opis doświadczenia 1 g ześrutowanego ziarna pszenicy (oraz jęczmienia, pszenżyta i owsa w osobnych próbach) zalewamy 200 cm3 wody destylowanej Dokładnie mieszamy, wytrząsamy co 5 minut i po 30 minutach przesączmy, wylewając pierwsze partie przesączu 1cm3 wyciągu badanej β-amylazy przenieść do probówki umieszczamy w łaźni wodnej o temperaturze 20 stopni Celsjusza Dodajemy 1cm3 roztworu badanej skrobi, uprzednio doprowadzonej do temperatury 20 stopni Celsjusza Po 180 sekundach dodajemy 2 cm3 odczynnika Probówkę zanurzamy na 5 minut we wrzącej łaźni wodnej Oziębiamy pod bieżąca woda i rozcieńczamy 20 cm3 wody Wykonujemy próbę kontrolna gdzie, zamiast skrobi, używamy 1 cm3 wody. Najpierw dodajemy odczynnik, potem enzym Porównujemy absorbancję otrzymanych wyników z wynikiem z próby kontrolnej przy użyciu filtru zielonego S53 w kuwetach o średnicy 20 mm Wartości ekstynkcji, wyrażone w mg maltozy, odczytujemy z krzywej wzorcowej w sposób następujący; Do 2 cm3 roztworu, zawierającego maltozę w ilości od 0,2-2 mg dodajemy 2 cm3 odczynnika Mieszaniny umieszczamy na 5 minut we wrzącej łaźni wodnej, ochładzamy, rozcieńczamy 20 cm3 wody Porównujemy na fotokolorymetrze z próbą kontrolną Obserwacje Pod wpływem gotowania roztwory zmieniły barwę, w skali od jasno-pomarańczowego po bardzo ciemny brąz. Ciemniejszą barwę zaobserwowaną przy większym stężeniu maltozy. Wzory Tabela i obliczenia Lp. Stężenie maltozy [mg/cm3] T1 [%] T2 [%] Tśrednie [%] Próba kontrolna 0 0 0 0 1. 0,2 0,04 0,04 0,04 2. 0,4 0,12 0,09 0,105 3. 0,6 0,21 0,22 0,215 4. 1,2 0,38 0,37 0,375 5. 1,6 0,57 0,5 0,535 6. 2,0 0,74 0,59 0,665 Wartości transmitancji dla; pszenica- 0,63 - 1,875 jęczmień- 0,18 - 0,275 pszenżyto- 0,27 - 0,8 owies- 0,27 - 0,8 Obliczenia; 1 cm3 przesączu – 5 mg mąki 200 cm3 przesączu - 1000 mg mąki 1,875 mg maltozy – 1 cm3 przesączu 375 mg maltozy – 200 cm3 przesączu 0,275 mg maltozy – 1 cm3 przesączu 55 mg maltozy – 200 cm3 przesączu 0,8 mg maltozy – 1 cm3 przesączu 160 mg maltozy – 200 cm3 przesączu Aktywność β-amylazy wyniosła 435,192 mg maltozy na 1 g suchego ziarna pszenicy, 55g dla jęczmienia i 160 g dla pszenżyta i owsa. Wnioski Rozbieżne wyniki w innych grupach świadczą o tym, że wartość dla próby
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)