Biochemia – sprawozdanie 8 Hydroliza lipidów mleka za pomocą lipazy trzustkowej Opis doświadczenia Do kolby stożkowej o pojemności 250 ml odmierzamy 50 ml mleka (cztery próby, po jednej dla mleka zawierającego 18, 12, 2 i 3,4% tłuszczu). Kolby umieszczamy w łaźni wodnej w temperaturze 38 stopni Celsjusza Przygotowujemy pięć ponumerowanych kolb stożkowych o pojemności 100 ml i do każdej odmierzamy po 12,5 ml metanolu Po upływie 10 minut od momentu wstawienia kolby z mlekiem do łaźni, dodajemy do mleka 15 ml przygotowanego wyciągu enzymatycznego z trzustki i dokładnie mieszamy Kolbę pozostawiamy w łaźni wodnej i co kilka minut mieszamy Po 15 minutach od dodania wyciągu enzymatycznego pobieramy z mieszaniny reakcji 5 ml roztworu do kolby stożkowej o pojemności 100 ml (próba nr 1) i w sposób analogiczny pobieramy kolejne próby w odstępach 15-minutowych Poszczególne próbki miareczkujemy 0,05 M roztworem KOH wobec fenoloftaleiny, do pojawienia się lekko różowego zabarwienia Wykonujemy próbę zerową 5 cm3 wyciągu enzymatycznego przenosimy do probówki i ogrzewamy do wrzenia w celu inaktywacji enzymu Do kolby stożkowej o pojemności 100 ml odpipetowujemy 5 ml mleka, 1,5 ml przesączu (uprzednio oziębionego) wyciągu enzymatycznego praz 12,5 ml metanolu Próbę miareczkujemy przy użyciu 0,05M roztworu KOH wobec fenoloftaleiny Wyniki zbieramy i przedstawiamy w postaci tabeli i wykresu zależności ilości hydrolizowanych kwasów tłuszczowych w czasie Tabela Dla mleka 18% Nr próby Czas (min.) Ilość 0,05 KOH zużytego do miareczkowania [ml] Mikroekwiwalenty kwasów tłuszczowych 0 0 6,5 1 15 8 300 2 30 9,6 620 3 45 10 700 4 60 11,5 1000 5 75 13,1 1320 Dla mleka 12% Nr próby Czas (min.) Ilość 0,05 KOH zużytego do miareczkowania [ml] Mikroekwiwalenty kwasów tłuszczowych 0 0 5,2 1 15 7,8 520 2 30 9,1 780 3 45 10,8 1120 4 60 11,2 1200 5 75 13 1560 Dla mleka 2% Nr próby Czas (min.) Ilość 0,05 KOH zużytego do miareczkowania [ml] Mikroekwiwalenty kwasów tłuszczowych 0 0 7,2 1 15 7,5 60 2 30 7,9 140 3 45 8,8 320 4 60 9,8 520 5 75 11,1 780 Dla mleka 3,2% Nr próby Czas (min.) Ilość 0,05 KOH zużytego do miareczkowania [ml] Mikroekwiwalenty kwasów tłuszczowych 0 0 4,8 1 15 5,9 220 2 30 8,9 820 3 45 10,85 1210 4 60 11,3 1300 5 75 12,65 1570 Obliczenia Mikroekwiwalenty=[(A-B)x1000]/D A – ilość ml 0,05 M KOH zużyta do miareczkowania próby właściwej
(…)
… zerowej
C – stężenie molowe użytego do miareczkowania KOH
D – ilość ml mleka w próbie poddanej miareczkowaniu
Dla mleka 3,2%
[(5,9-4,8)*1000]/5=220
[(8,9-4,8)*1000]/5=820
[(10,85-4,8)*1000]/5=1210
[(11,3-4,8)*1000]/5=1300
[(12,65-4,8)*1000]/5=1570
Dla mleka 2%
[(7,5-7,2)*1000]/5=60
[(7,9-7,2)*1000]/5=140
[(8,8-7,2)*1000]/5=320
[(9,8-7,2)*1000]/5=520
[(11,1-7,2)*1000]/5=780
Dla mleka 12%
[(7,8-5,2)*1000…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)